[发明专利]一种产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的单菌落琼脂块筛选方法

权利要求书

1.一种快速筛选产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的方法，包括如下步骤：

(1)诱变后的重组大肠杆菌，稀释涂布于平板培养基，培养至大小合适的单菌落长出；所述培养基成分为：甘油20g/L，胰蛋白胨8.81g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸铵5g/L，NaCl2g/L，Mg²⁺0.02％，Ca²⁺0.2％，L-脯氨酸8.98g/L，Fe²⁺2mmoL/L，琼脂1.5％；

(2)用打孔器将单菌落取出置于滤纸上，以使菌落产生的反式-4-羟脯氨酸渗透到滤纸上；

(3)用移液枪分别点加试剂①和试剂②，使其显色；试剂①为吲哚醌溶于乙醇和冰醋酸的溶液；②为对二氨基苯甲醛溶于丙酮和浓盐酸的溶液；

(4)挑选出产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌菌株；标准色板制备：①制备L-脯氨酸不同浓度梯度溶液：浓度分别为0g/L、0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L、0.30g/L、0.35g/L、0.40g/L、0.45g/L、0.50g/L、0.55g/L、0.60g/L；②制备L-羟脯氨酸不同浓度梯度溶液：浓度分别为0g/L、0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L、0.30g/L、0.35g/L、0.40g/L、0.45g/L、0.50g/L、0.55g/L、0.60g/L；③制备L-脯氨酸和L-羟脯氨酸的不同浓度梯(1：1)混合液：二者浓度分别为0g/L、0.10g/L、0.15g/L、0.20g/L、0.25g/L、0.30g/L、0.35g/L、0.40g/L、0.45g/L、0.50g/L、0.55g/L、0.60g/L；④将以上制备的三种溶液，每个浓度分别取5μL点加到三张滤纸上，间隔为3cm；；⑤点加5μL试剂①后，热风吹干；⑥点加5μL试剂②后，热风吹干；将步骤(3)的显色结果与标准色板进行比对，显色圈与菌落直径之比越大，以及显色圈越深，L-羟脯氨酸产量越高。