[发明专利]一种纯化还原型β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯化辅酶的方法，尤其涉及一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法。

背景技术

还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是辅酶I的还原型，又称β-Nicotinamide adenine dinucleotide,reduced form，通常情况下为二钠盐型式，以下简称NADH。NADH在生物体内产生于糖酵解和呼吸作用的柠檬酸循环中，NADH经由一个电子传递的氧化反应可产生大量的ATP，从而满足生物体的能量需要。还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸可用于氧化还原反应当中，以实现电子传递，所以它的用途非常广泛，可以用于化工催化反应、原料药生产、保健品行业、化妆品行业等。NADH为原料的保健品，主要用于抗衰老、防治慢性病等领域。

目前，由于NADH的化学性质不稳定，各种环境因素都会使其降解，选择传统的离子交换层析生产过程不易控制降解，导致最终的产品纯度只有90%左右，收率只有60%，产能受到很大限制，不能满足市场的需求。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，旨在解决现有纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的工艺存在纯度低、收率低及产能受到限制的问题。

为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，包括步骤：

a、对酶催化反应所得反应液先后进行微滤和纳滤，收集浓缩液备用；

b、然后在浓缩液中加入离子对试剂，用反相色谱柱为固定相，以缓冲盐溶液为A相、乙醇为B相，进行梯度洗脱纯化；

c、采用阳离子交换树脂将纯化后滤液中的阳离子转化为钠离子；

d、对步骤c所得的滤液进行纳滤，最后用真空冷冻干燥机冻干。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤a中纳滤采用的纳滤膜为截留分子量200的中空纤维膜。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤a中浓缩液浓度为30-40g/L。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤b中离子对试剂为四甲基氢氧化铵。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤b中反相色谱柱为八烷基硅烷键合硅胶。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤b中缓冲盐溶液为盐酸和氨水配成的浓度为20mM的缓冲盐溶液。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤b中缓冲盐溶液的pH为7-9。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤b中梯度洗脱时间为40min。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤c中阳离子交换树脂为001×7强阳离子交换树脂。

所述的纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，所述步骤c具体为：将阳离子交换树脂用盐酸洗3倍柱体积，再用氢氧化钠洗3倍柱体积，最后用纯水洗涤柱子至pH为7-8，将待转盐的纯化后的滤液上样到阳离子交换柱中，收集洗脱液即为转盐后的产品溶液。

有益效果：本发明提供的一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，本发明采用反相高效液相色谱法和阳离子交换法纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，获得的产品纯度高达98%，收率高达90%以上，生产效率也比其他工艺提高了1倍以上，大大降低了生产成本，符合市场对产量和价格的需求，具有广泛的应用前景。

具体实施方式

本发明提供了一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，该方法是采用反相高效液相色谱法和阳离子交换法对还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸进行纯化，从而使得纯化后的还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸纯度高、收率高，达到产业化要求。

一种纯化还原型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的方法，其中，包括步骤：

a、对酶催化反应所得反应液先后进行微滤和纳滤，收集浓缩液备用；

b、然后在浓缩液中加入离子对试剂，用反相色谱柱为固定相，以缓冲盐溶液为A相、乙醇为B相，进行梯度洗脱纯化；