[发明专利]一种引导组织再生膜的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种引导组织再生膜的制备方法及其应用。

背景技术

引导组织再生(GTR)的概念在1982年由Nyman等首次提出，随后便引起了广大学者的关注，被应用于多种软硬组织的修复与再生研究中，如骨缺损、皮肤创伤和肌腱断裂等。引导组织再生技术的基本原理是通过膜的物理屏障功能，将缺损部位与周围组织相隔离并支持一定的组织生存空间，阻止结缔组织、上皮细胞进入缺损区，从而使得组织修复再生能力得到最大程度的发挥。

牙种植中常用膜可根据其能否在体内被吸收、降解分为不可吸收性膜与可吸收性膜。具有生物可降解性的可吸收性膜是目前GTR技术研究较多的一类材料，此种材料的使用中必须掌握好组织再生与材料降解吸收之间的关系。理想的可吸收性膜，能选择性地引导组织再生，当这一过程完成时，膜性材料将被完全降解吸收。因此，可吸收性GTRM应具备以下几个条件：①能选择性的引导细胞再生；②具有良好的生物组织相容性及细胞亲和性；③具有良好的机械屏障作用，分隔不同细胞；④在被修复的组织面与膜之间能保持一定空间(膜应具有一定的厚度和机械强度，防止塌陷)；⑤膜的降解速率有可预测性，降解时间与组织再生进程要协调；⑥膜降解过程不妨碍伤口的愈合，降解产物在有机体内无不良反应；⑦无免疫原性；⑧具有一定的柔韧性和临床可操作性。不可吸收性膜为非生物降解性材料，包括钛膜、聚四氟乙烯膜(e-PTFE)、微孔滤膜、纤维素膜，临床上广泛应用的是前二种引导膜材料，其中，钛膜由于表面光滑不利组织的附着，应用时既要有足够大小保证有效的细胞屏障作用，又要让黏骨膜瓣与深部的缺损区有足够的接触面才能避免创口裂开，且其使用后存在伤口裂开和膜暴露等常见并发症；聚四氟乙烯膜是引导组织再生技术最早采用的一种生物膜，它不可降解，不会引起组织发生炎症反应和免疫反应。大量动物实验与临床研究证实e-PTFE膜具有柔韧性、良好的生物相容性和容易操作等优点，能够保证理想的成骨效果，但因其不可吸收，e-PTFE生物膜在临床应用中存在较多的并发症，如黏膜裂开、膜暴露、感染等。这些并发症的出现常导致成骨失败，因此不可吸收膜在临床上使用得越来越少，有被可吸收生物膜取代的趋势。

现有技术生产的天然膜材料在冻干辐照后，天然的胶原蛋白会被大幅破坏，最终导致撕裂力下降，降解速度加快，不能起到很好的屏障作用，无法分隔不同类型的细胞长入，并且现有技术生产的天然膜材料添加大量脱脂、脱细胞试剂，对膜的破坏相对较大，往往导致膜的部分性能的大幅降低。现有技术中也有用交联剂交联天然膜材料来提高产品撕裂力和耐降解性能，但由于交联后的产品降解时间过长，不适用于在牙种植治疗方面的应用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种引导组织再生膜的制备方法。

本发明提供的引导组织再生膜的制备方法包括如下步骤：

(1)使用表面活性剂溶液浸泡处理离体动物的皮肤，得到表面活性剂处理后的皮肤；

(2)使用碱溶液浸泡处理步骤(1)中所述表面活性剂处理后的皮肤，得到碱溶液处理后的真皮组织；

(3)使用过氧化物溶液浸泡处理步骤(2)中所述碱溶液处理后的真皮组织，得到过氧化物处理后的真皮组织；

(4)使用辐照保护试剂溶液浸泡处理步骤(3)中所述过氧化物处理后的真皮组织，得到辐照保护试剂溶液处理后的真皮组织；

(5)使用缓冲液浸泡处理步骤(4)中所述辐照保护试剂溶液处理后的真皮组织，得到缓冲液处理后的真皮组织；

(6)将步骤(5)中所述缓冲液处理后的产物依次进行冷冻干燥和辐照灭菌，得到所述引导组织再生膜。

上述方法中，所述步骤(4)中，所述辐照保护试剂为类黄酮类辐照保护剂；所述类黄酮类辐照保护剂可为黄芩素、芹菜素、山奈酚、杨梅素、槲皮素或甘草素。

上述方法中，所述类黄酮类辐照保护剂为黄芩素。

上述方法中，所述辐照保护试剂溶液中，所述辐照保护试剂的质量分数为0.01-0.5％。

上述方法中，所述步骤(4)中，所述浸泡处理的温度为8-20℃；所述浸泡处理的时间为1-18h。

上述方法中，

所述步骤(1)中，所述表面活性剂为TritonX-100、Tween-80或Tween-40；

所述步骤(2)中，所述碱溶液为碱性化合物水溶液；所述碱性化合物为NaOH或KOH；所述碱性化合物具体为NaOH；

所述步骤(3)中，所述过氧化物溶液为过氧化物水溶液；所述过氧化物为H₂O₂；