[发明专利]一种微阵列生物芯片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种微阵列生物芯片，包括玻璃芯片基底和修饰层，其特征在于，所述修饰层包括依次叠加在所述玻璃芯片基底表面的铬层、银和/或金层、自组装单分子层、光交联剂和高分子层。

2.根据权利要求1所述的微阵列生物芯片，其特征在于，所述铬层的厚度为0.1-9nm，优选为3nm；

优选地，所述银和/或金层的厚度为40-60nm，优选为47-50nm；

优选地，所述自组装单分子层的试剂为末端功能化的硫醇；

优选地，所述末端功能化的硫醇为单硫醇和/或双硫醇；

优选地，所述末端功能化的硫醇为烷硫醇和/或带有PEG嵌段的硫醇；

优选地，所述末端功能化的基团为羟基、羧基、氨基、醛基、环氧基或甲氧基；

优选地，所述光交联剂为含有光敏感基团的试剂，优选为吖丙因、重氮、乙酰苯、二苯甲酮或蒽醌类中的任意一种或者至少两种的混合物；

优选地，所述高分子为聚乙二醇及其衍生物、含氟聚合物、聚丙烯酸及其衍生物、聚甲基丙烯酸及其衍生物、聚苯乙烯、聚乳酸、两性甜菜碱类聚合物、硝化纤维、壳聚糖或葡聚糖及其衍生物中的任意一种或至少两种的混合物。

3.根据权利要求1或2所述的微阵列生物芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在玻璃芯片基底镀上铬层，再在铬层的表面镀上银和/或金层；

(2)完成步骤(1)后清洗芯片，在表面形成自组装单分子层；

(3)将光交联剂共价结合于自组装单分子层的表面；

(4)将高分子溶液旋涂在完成步骤(3)的芯片表面；

(5)待步骤(4)所述高分子溶液的溶剂挥发后，用紫外光照射使所述高分子接枝在芯片表面；

任选地，进行步骤(6)：

(6)将接枝在芯片表面的高分子进行功能化。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述镀上铬层及银和/或金层的方法为金属热蒸和/或离子溅射；

优选地，步骤(3)所述共价结合的方式为酰胺化、酯化、开环或亲核取代反应；

优选地，步骤(4)所述高分子溶液的溶剂为去离子水、乙醇、甲醇、二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺中的任意一种或者至少两种的组合；

优选地，步骤(5)所述紫外光的波长为200-400nm，优选为365nm；

优选地，步骤(6)所述功能化的基团为羟基、羧基、醛基、氨基、环氧基、氰基、炔基、叠氮基、吖丙因或生物素。

5.一种蛋白微阵列，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的微阵列生物芯片。

6.根据权利要求5所述的蛋白微阵列的制备方法，其特征在于，所述制备方法为将蛋白质配制成溶液后，点样并孵育而制成；

优选地，所述将蛋白质配制成溶液为将蛋白质溶于缓冲液中；

优选地，所述缓冲液为PBS缓冲液、HEPES缓冲液、Tris-HCl缓冲液或HBS-EP缓冲液；

优选地，所述缓冲液的pH值为所述蛋白质等电点以下0-1个单位；

优选地，所述孵育的温度为3-8℃，优选为4℃；

优选地，所述孵育的相对湿度为50-80％，优选为70％。

7.一种检测方法，其特征在于，所述方法利用权利要求5所述的蛋白微阵列。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)清洗固定有蛋白微阵列的芯片，吹干后放入表面等离子共振分析成像仪；

(2)向表面等离子共振分析成像仪中加入缓冲液；

(3)待基线稳定，用重生液将所述芯片的表面重生；

(4)通入检测液，重生；

(5)通入校正液，检测蛋白质信号。