[发明专利]检测孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产品检测的技术领域，尤其涉及一种检测孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

孔雀石绿作为染色剂，用于皮革业、纺织业、制陶业、食品和生物的染色，是人工合成的三苯甲烷类化学物。同时，孔雀石绿也可以用作杀菌剂，驱虫剂，用于预防与治疗水生动物细菌、真菌和寄生虫的感染，由于其成本低，效果显著，所以被普遍用在水产养殖业中。然而随着研究的深入，孔雀石绿的高毒性，高残留的性质及潜在的致畸、致癌、致突变等毒副作用倍受大家的关注。

继“苏丹红1号”后，2005年英国发现的鲑鱼体内的“孔雀石绿”事件又一次掀起了大的食品安全风暴。同年六月，在对我国湖北、河南等地区的水产养殖业的调查中发现，孔雀石绿被用来预防和治疗鱼的水霉病、小瓜虫病等和延长在运输过程中鱼鳞受损的鱼的生命，该发现引起了国家的重视和民众的恐慌。孔雀石绿在2002年被作为禁用兽药列入禁止在食品动物中使用的兽药名单上，因此我国要求孔雀石绿不得在食品中检出。近些年来，水产品安全问题越来越受到重视，如我国制定了一系列法律法规，加强对水产品监督管理，完善可追溯体系，普及水产品养殖技术等相应措施，但是违法添加禁用渔药的事件仍是频频曝光。2005年香港在一批来自内地的一些豆豉鲮鱼罐头中查出含有孔雀石绿，大大降低了这些罐头的销售额；2006年由于加工鳗鱼中查出孔雀石绿，导致第一天然食品利润下跌。英国、美国、日本等一些国家已经将孔雀石绿列为食品中不得检出的药物，欧盟也对孔雀石绿的残留量做出明确规定，检出限为2μg/kg。孔雀石绿的屡禁不止不仅使消费者人心惶惶，还使我国经济遭受损失，在多个批次出口的水产品中查出药残超标，让我国水产品出口受到限制和环境壁垒。严重影响我国水产养殖业经济名誉和健康发展。

水产品的安全问题受到了政府和人民的广泛关注，尤其是孔雀石绿的屡禁不止，让大家对水产品安全更为忧心忡忡。因此，我们不仅要增强对孔雀石绿的监督管理，还要加强检测力度。目前检测药残的方法主要是应用仪器进行检定，但是这些方法操作复杂，所需时间长，成本高，不适于大批量检测，所以要建立一种快速检测方法，能够快速，简单的实现现场检测，保证食品来源是健康、安全的，从而有效的实现食品安全生产的各个环节。

目前，常用于检测孔雀石绿残留量的方法主要包括：理化分析法、微生物学检测法和免疫分析检测法。常见的理化分析检测法有高效液相色谱法、色谱-质谱联用技术、薄层色谱法、毛细管电泳法等，这些检测方法灵敏度高，检测结果可靠，常作为确证方法检测药物残留，但设备昂贵，样品前处理过程复杂，对操作人员要求高，耗时较长，不适合批量样品的快速检测。微生物学检测法不需要专业昂贵的仪器，但操作耗时长，特异性、敏感性差，容易受其他药物的干扰，在定量上尚不成熟，检测结果有时不能满足国家最高残留限量的要求，不能满足现代检测的需要。随着免疫学和免疫技术的飞速发展，免疫分析法迅速发展起来，成为检测药物残留的一种新型方法。免疫分析法主要是利用抗原、抗体的特异性结合来检测药物、蛋白质、激素、微生物等各种物质，主要分为：放射性免疫法、酶联免疫吸附法、免疫传感器法、胶体金免疫层析技术等。胶体金免疫层析技术是一种新型的免疫标记技术，是在免疫层析的基础上建立起来的，以胶体金为示踪物与抗原、抗体特异性反应相结合的一种检测技术。该检测方法结果判读简单，不需要专业的操作人员，检测时间短，携带方便，特别适合大批量样品的药物残留的快速筛查。

在现有技术中，利用胶体金免疫法检测孔雀石绿药物残留的研究也有不少，赵春城等研制出用于检测无色孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条，检出限在20μg/L；山珊等将试纸条上T线和C线的吸光度通过胶体金读取仪进行读取，建立了用胶体金试纸条定量检测孔雀石绿的方法。欧美等国于20世纪70、80年代，就已经开始关注在动物体内抗生素的残留问题，制定了兽药的最高残留量(MRL)、休药期(WDT)及相关的法规和标准。欧盟(EU)规定了，孔雀石绿最高残留限量(MRL)为2μg/kg。因此，现有技术的检测孔雀石绿的胶体金免疫检测试纸尚不能满足欧美等西方国家的标准，对于产品出口来说，对于我国的水产企业带来了很大的困难。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种检测孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性强、操作简便，检测快速、准确并适合现场使用的专门用于检测检测孔雀石绿的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法，以便对孔雀石绿药物进行高灵敏度的检测，符合欧盟及WTO的最低检出限的规定。