[发明专利]一种从复杂环境样品筛选与计数产淀粉酶真菌的培养基

说明书

本发明提出了一种从复杂环境样品中筛选产淀粉酶真菌的培养基，该种培养基组成为：NaNO₃ 2g，K₂HP0₄ 1g，KCl0.5g，MgSO₄ 0.5g，FeSO₄ 0.01g，可溶性淀粉10g，琼脂15g，曲利苯蓝0.1g，水1000mL，卡那霉素终浓度54μg/mL，制霉菌素终浓度0.9～1.8μg/mL。该培养基是含细菌和真菌抗生素混合的培养基，具有能完全抑制细菌生长，真菌菌落较小，菌丝较短，菌落与菌落重叠少，由曲利苯兰显色水解圈方便选择筛选产淀粉酶真菌；该培养基能一次对复杂环境中产淀粉酶真菌进行培养、分离、计数，且配制简单，计数操作简单易行，不需纯化，筛选周期短。

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体地说是涉及一种从复杂环境样品筛选与计数产淀粉酶真菌的培养基。

背景技术

复杂环境样品如土壤样品，酒曲样品等含有众多数量和种类的微生物，各种功能相同或者相近的微生物集合体构成了不同的微生物功能群，如本发明关注的淀粉降解微生物功能群。微生物功能群的研究在工业，农业，微生物治理，医学和基因工程方面均有重要的现实意义。

研究微生物功能群其中重要的方法包括应用特定的选择培养基进行分离培养和计数。但是该种方法在培养过程中主要面临三个问题：环境样品成分复杂，细菌众多，容易造成污染；真菌生长速度太快，很快占领整个平板培养基，这样真菌之间的界限很难确定，不能准确计数；真菌种类众多，不能直观的选择出目标微生物，例如产淀粉酶真菌。对于产淀粉酶真菌的筛选，现有报道中的解决办法一般是分两步完成：先用含有细菌抗生素的真菌培养基如马铃薯培养、查氏培养基、或者马丁氏琼脂培养基分离所有优势真菌，然后将分离到的真菌接种到淀粉培养基进行鉴定。但是该种方法需要配制大量培养基，总培养时间长，工作量大。对于产淀粉酶真菌的计数则少有报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有产淀粉酶真菌计数与筛选培养基的不足，提出一种对于产淀粉酶真菌快速培养、分离计数与筛选的新型培养基，该种培养基是含细菌和真菌抗生素混合的培养基，具有能完全抑制细菌生长，能一次对复杂环境中产淀粉酶真菌进行培养、分离、计数，且配制简单，计数操作简单易行。

本发明新型培养基的配制与筛选步骤：

1、配制下述培养基

(1)配制S培养基(基础培养基)，其成分为NaNO₃2g，K2HP0₄1g，KCl 0.5g，MgSO₄0.5g，FeSO₄0.01g，可溶性淀粉10g，琼脂15g，曲利苯蓝0.1g，水1000mL；

配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后补足水分至1000mL。121℃灭菌30min，待用。

(2)配制5种细菌抗生素培养基(共8种)

a)SC培养基(S培养基中加氯霉素至终浓度97.5mg/L)，

b)SK培养基(S培养基中加卡那霉素至终浓度分别为18μg/mL、36μg/mL、54μg/mL、72μg/mL，分别编号为SK1、SK2、SK3、SK4。)，

c)SP培养基(S培养基中加氨苄青霉素至终浓度112.5mg/L)，

d)SS培养基(S培养基中加链霉素至终浓度30mg/L)，

e)ST培养基(S培养基中加四环霉素至终浓度30mg/L)。

(3)配制含细菌和真菌抗生素混合培养基(共16种)