[发明专利]一种检测穆汀斯克罗诺杆菌的方法及引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测穆汀斯克罗诺杆菌核苷酸片段的引物，其特征在于，所述的引物序列为：由上游引物序列5‘GGGATACGCAGGAGGTGGCA’和下游引物序列5’GATGCTGCCTGCCAGCAGG’组成的引物对；或者上述引物对的上游引物向5’端方向延伸10个碱基，向3’端方向延伸10个碱基，下游引物向3’端方向延伸10个碱基，向5’端方向延伸10个碱基区域范围内得到的引物序列。

2.一种用于检测穆汀斯克罗诺杆菌核苷酸的探针，其特征在于，所述的探针序列为：5‘CATTTTAGCGCTTGATACTCCCCTGGGC’或者为上述探针序列向3’端方向延伸10个碱基和向5’端方向延伸10个碱基区域范围内得到的探针序列。

3.一种检测穆汀斯克罗诺杆菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求2所述探针一端标记有报告荧光染料，另一端标记有猝灭荧光染料；

(2)以待测样品的DNA为模板，利用权利要求1所述的上、下游引物以及上述标记有荧光素的探针进行实时荧光定量PCR反应，每个循环结束后采集数据；

(3)反应结束后根据扩增曲线判断是否有穆汀斯克罗诺杆菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述报告荧光染料采用下列荧光基团中的任意一种：Fam、Hex、Tet、Joe、Vic、FITC、Cy3和Cy5；所述淬灭荧光染料采用下列荧光基团中的任意一种：Tamra、Rox、Dabcy1、BHQ1和BHQ2。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，以25μl的反应体系计，所述实时荧光定量PCR反应的条件为：在反应体系加入10×PCR Buffer，dNTPs，上、下游引物，标记有荧光素的探针，Taq酶和3～5μl的待测样品的DNA，并用RNase Free dH₂O补至总体积25μl，上述组分的终浓度如下：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，以25μl的反应体系计，所述实时荧光定量PCR反应的条件为：

7.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR反应条件是：95℃变性1min；以95℃5s，60℃40s扩增40个循环。

8.一种检测穆汀斯克罗诺杆菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1的上、下游引物、权利要求2中的探针、10×PCR Buffer、dNTPs和Taq酶。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，以25μl的反应体系计，各组分如下：

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，以25μl的反应体系计，各组分如下：