[发明专利]一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。

背景技术

栗木鞣花素（Castalagin），是从使君子科(Combretaceae)榆绿木变种Anogeissus acuminata(Roxb.ex DC.)Guill.&Pers.var.lanceolata Wall.ex C.B.Clarke的茎分离出的一种鞣质类化合物，为类白色粉末，分子式为C₁₉H₁₈O₄，分子量为934.34，结构式为

药理研究表明，栗木鞣花素具有抗高血压活性，静注本品降低自发性高血压大鼠的血压，这是由于抑制交感神经的活性和直接扩张血管所致；具有细胞毒活性，对黑色素瘤RPMI－7951的ED50为0.79μg/ml。

目前，国内对栗木鞣花素的研究较少，尚处于起步阶段。因此，研究出一种制备栗木鞣花素的方法是非常必要的，对于扩大药源以及榆绿木茎皮的综合利用具有很重要的意义。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，，提供一种栗木鞣花素的制备方法及抗肿瘤应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种栗木鞣花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取榆绿木茎皮，经粉碎处理，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，进行超临界CO₂萃取，解析，收集榆绿木茎皮萃取物；

（2）萃取物与D101大孔树脂按重量比1:1-2.5充分混匀，装入层析柱，然后用30-90%乙醇洗脱，流速为0.8-2BV/h，收集洗脱液，浓缩，得粗品；

（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的栗木鞣花素，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分；

（4）将栗木鞣花素组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素。

所述步骤（1）中超临界萃取温度为45-55℃，萃取压力为30-43MPa，解析温度为25-42℃，解析压力为6-10MPa，CO₂流量为15-20L/h。

所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:3-5:4-6:2-3，取上相做固定相，下相为流动相，主机转速700-1000rpm，流速为1-3ml/min。

所述制备的栗木鞣花素，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。

（1）采用超临界提取技术对环境无污染；（2）通过D101大孔树脂对乙酰精宁类化合物的吸附和洗脱，操作简单、分离效果好；（3）采用高速逆流色谱制备工艺，较制备液相色谱制备工艺而言，克服了样品吸附、损失和峰形拖尾等缺点，且具有制备量大、易于工业推广等优点；（4）添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

栗木鞣花素的制备

取榆绿木茎皮，经粉碎处理，称取1kg，置于萃取釜中，以乙醇作为夹带剂，通入超临界CO₂流体，CO₂流量为18L/h，超临界萃取温度为48℃，萃取压力为32MPa，解析温度为29℃，解析压力为7MPa，进行超临界CO₂萃取1h，解析，收集萃取物，与D101大孔树脂按重量比1:1.5充分混匀，装入层析柱，依次用去离子水、30%乙醇溶液和90%乙醇溶液洗脱，流速为0.8BV/h，收集高浓度乙醇洗脱液，减压浓缩，得粗品；采用高速逆流色谱法分离纯化粗品中的栗木鞣花素，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，主机转速1000rpm，泵入下相做流动相，流速为3ml/min，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集栗木鞣花素组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得栗木鞣花素，含量97.6%。