[发明专利]一种乙酸的反相间接光度色谱分析方法

说明书

技术领域

本发明属于乙酸的定量分析方法，特别是涉及一种以二苯胍为离子对探针试剂的反相间接光度液相色谱分析方法。

背景技术

乙酸，俗称醋酸、冰乙酸，市场上出现的乙酸产品主要分为工业乙酸和食品添加剂乙酸，世界范围内年需求量大约为650万吨。随着国内食醋供需关系极度不平衡(市场上酿造食醋的份额只占到5％)促使配制食醋标准的出台，工业乙酸违规代替食品添加剂乙酸的使用对人身安全影响重大。作为基础化工原料乙酸产品，其纯度影响着深加工产品的质量。建立简单、快速、准确、安全的乙酸含量检测方法，对于监测产品在生产和使用时的质量极其重要。目前，乙酸的检测方法主要以滴定法为主(GB 1903-2008食品添加剂冰乙酸)，另有生物方法(乙酸测定试剂盒及乙酸浓度测定方法，中国，101334511，2008-12-27)、气相色谱法、离子色谱法等。在滴定分析中，弱有机酸在水中溶解度小，需要特殊处理，且无法进行分级滴定，影响溶液中有机酸种类和含量的确定。气相色谱测定乙酸制品时存在极性较大，色谱柱分离效果差、柱效低，易受有机溶剂干扰，色谱柱使用寿命短等问题。而离子色谱技术目前更长于无机离子分析，虽可用于一些小分子有机酸的分离分析，但与其他饱和一元羧酸分离需要用专用柱，而且极易受到样品中杂质污染，无法获得满意分离。分析成本相对较高(仅离子色谱分离柱的售价高出RP8柱3倍以上)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种针对无紫外或末端吸收的阴离子型化合物乙酸的液相色谱-紫外检测的分析方法。

本发明技术方案实验原理如下：此反相间接光度色谱分析过程包括三大机理，平衡机理、反应机理和分离机理。(1)平衡机理：在嵌有酰胺极性基团的RP8柱上，流动相中的离子对探针试剂和改性剂分子富集在固定相分子上，此平衡过程(图1)分为四个阶段：富集阶段：离子对试剂在整个色谱柱固定相上富集，未流经紫外检测器，无紫外响应信号；饱和阶段：固定相上二苯胍吸附近于饱和，不再吸附，流动相中二苯胍流出过检测器，色谱峰上出现明显的突越；扰动阶段：改性剂丁酸逐渐解离出的H⁺会与流动相中质子化的二苯胍在固定相中竞争有限的位点，部分质子化二苯胍脱离位点进入流动相，其含量增加，呈现出高于平衡态的色谱图；平衡阶段：固定相表面镶嵌了一层“电中性膜”。宏观上，各离子呈现出静态电层带；微观上，离子间有条不紊的进行着动态平衡。平衡后固定相表面示意图见图2。(2)反应机理：选定内嵌极性酰胺基团的RP8色谱柱，此酰胺基主要以共轭态状态存在，部分以离子态存在；酸性体系的流动相中，H⁺使得共轭态的酰胺基质子化，或者质子化的二苯胍直接与酰胺基上的-O^-结合，而解离的酸根阴离子与酰胺基上的结合。当乙酸样品溶液进入色谱柱时，柱头处样品溶液中H⁺浓度梯度较大，扰乱平衡的固定液，导致带正电的二苯胍离子与样品阴离子形成中性缔合物。样品溶液中H⁺浓度大于流动相中H⁺浓度是发生离子反应的先决条件。(3)分离机理：离子对化合物分离主要位于色谱柱端之后，进样浓度的高低影响反应区区间宽窄，但相对于色谱柱而言，分离区约占柱长99％以上。平衡后的固定相极性略微增强，并引入静电力作用，提高离子对化合物的色谱分离效果。受固定相极性等因素影响，在色谱柱中进行更佳有效地分离得到间接光度典型色谱图(图3)。空白对照反相间接光度色谱分离色谱图见图4。

具体测试步骤为：

(1)以离子对试剂二苯胍和改性剂丁酸为流动相，对RP8，3.5μm(4.6mm×150mm)色谱柱中固定相分子表面进行平衡构建；

(2)绘制乙酸标准品的标准曲线(图5)，测定其准确度和精密度；

(3)采用液相色谱仪配备紫外检测器测定乙酸标准品；

(4)对乙酸样品进行测定(图6)，并采用外标法或标准加入法定量。