[发明专利]源于红树林沉积物的可降解孔雀石绿的过氧化物酶及制备

权利要求书

1.源于红树林沉积物的过氧化酶基因mgv-peroxidase，其特征在于，所述过氧化物酶基因来源于红树林沉积物宏基因组序列；

所述过氧化物酶基因mgv-peroxidase的序列(SEQ ID No.1)如下：

SEQ ID No.1的信息：

1)名称：过氧化物酶基因mgv-peroxidase；

2)分子类型：DNA；

3)序列特征：

A)长度：561bp；

B)类型：核酸；

C)链性：双链；

D)拓扑结构：线性。

2.如权利要求1所述过氧化酶基因mgv-peroxidase编码的过氧化物酶Mgv-rPOD，其特征在于，其氨基酸序列(SEQ ID No.2)如下：

SEQ ID No.2的信息：

1)名称：过氧化物酶Mgv-rPOD；

2)分子类型：蛋白质；

3)序列特征：

A)长度：186aa；

B)类型：氨基酸。

3.如权利要求2所述过氧化物酶Mgv-rPOD的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)克隆所述过氧化物酶基因mgv-peroxidase；

2)将所述mgv-peroxidase插入表达载体，构建携带所述mgv-peroxidase的重组表达载体；

3)将所述重组表达载体转化到E.coli BL21(DE3)中；

4)选取转化后E.coli BL21(DE3)中的阳性克隆于培养基中进行发酵培养；

5)离心收集发酵后的E.coli BL21(DE3)细胞，重悬所述E.coli BL21(DE3)细胞于裂解缓冲液中进行裂解；

6)将步骤5)中裂解后的悬液进行离心，收集上清液；

7)将上清液与预先结合NiSO₄的R10-Flammable混匀，4℃结合45分钟，用浓度为200mM的咪唑洗脱即得所述过氧化物酶Mgv-rPOD。

4.如权利要求3所述过氧化物酶的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述表达载体为pET-32a载体。

5.如权利要求3所述过氧化物酶的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述培养基为含有100μg/mL氨苄青霉素和0.7％葡萄糖的2×YT培养基。

6.如权利要求3所述过氧化物酶的制备方法，其特征在于在步骤4)中，所述发酵条件为：37℃下振荡培养至A₆₀₀＝0.5，加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷至终浓度为1mM，而后于25℃诱导10小时。

7.如权利要求3所述过氧化物酶的制备方法，其特征在于在步骤5)中，所述裂解缓冲液配方为：0.5M NaCl，20mM Tris-HCl，pH8.0。

8.如权利要求3所述过氧化物酶的制备方法，其特征在于在步骤6)中，所述离心的条件为4000rpm，离心20min。

9.如权利要求3所述的过氧化物酶在降解孔雀石绿中的应用。