[发明专利]一种定量检测样本中髓过氧化物酶浓度的液态芯片试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外免疫检测技术领域，具体涉及一种检测样本中髓过氧化物酶浓度测定的试剂盒及其制备方法。

背景技术

根据世界心脏联盟统计，心血管疾病引起的死亡人数约占世界总死亡人数的1/3，心脑血管疾病的患病率、发病率和死亡率呈逐年上升趋势，已经成为人类健康的“头号杀手”，严重威胁人类的生命。对于心血管疾病的准确诊断预测有着重要的意义。

髓过氧化物酶(MPO)是一种相对分子质量为144KD的白细胞酶，是糖基化的血红素蛋白。在特定条件下,它能诱导氧化应激和组织损伤,作为系统炎症和氧化应激的标志物。大量流行病学研究显示MPO浓度的增高与冠心病密切相关，因此检测病人血浆中MPO的浓度对于冠心病患者具有十分重要的参考价值。

目前对于心血管疾病的免疫诊断方法，只能对一种单一的指标进行检测，由于不同指标存在的灵敏度、精确度以及特异性的差别，在临床诊断中经常出现高的假阴性率。

发明内容

本发明相对于传统的免疫测定法，旨在提供高通量、快速、准确的可同时检测多种心血管标志物的技术平台和试剂盒，该试剂盒同时还能降低假阴性率。

一种定量检测样本中髓过氧化物酶浓度的液态芯片试剂盒，包括包被有抗髓过氧化物酶的单克隆抗体的微球、带孔的平台载体、髓过氧化物酶的浓度梯度标准品、髓过氧化物酶质控品、荧光标记试剂标记的髓过氧化物酶抗体、样本缓冲液、洗液。

作为优选方案，所述微球为表面带有荧光色的、可以实现荧光编码的聚苯乙烯磁微球，带孔的平台载体每孔里面包被有1000-5000个微球，而每个微球含有2*10^-6-5*10^-5g抗髓过氧化物酶的单克隆抗体。

作为优选方案，所述带孔的平台载体为微孔反应板。

作为优选方案，所述髓过氧化物酶的浓度梯度标准品和髓过氧化物酶质控品为冻干粉末，所述髓过氧化物酶的浓度梯度标准品是将6个、浓度分别为0、50、100、200、400、800ng/ml的髓过氧化物酶标准品制成冻干粉末；髓过氧化物酶质控品是将2个，浓度为80、500ng/ml的髓过氧化物酶质控品制成冻干粉末。

作为优选方案，所述髓过氧化物酶的浓度梯度标准品和髓过氧化物酶质控品都是用髓过氧化物酶纯品与自制的髓过氧化物酶标准品稀释液按照1:200000-1:1000稀释而成，所述髓过氧化物酶标准品不少于2个，所述髓过氧化物酶质控品和所述髓过氧化物酶标准品的浓度不同，所述髓过氧化物酶质控品的作用是在试剂盒使用过程中起到核准校对的作用，即通过髓过氧化物酶质控品测值是否在质控范围内来对髓过氧化物酶标准品拟合出来的曲线进行核准校对，若髓过氧化物酶质控品测值合格，则可以利用标准曲线来拟合出样本中的髓过氧化物酶的浓度值。

作为优选方案，所述的髓过氧化物酶标准品稀释液，是在PH7.0-7.4、浓度为10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的动物血清、0.01-0.5％质量分数的防腐剂、1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.05-1％质量分数的表面活性剂混合而成。

作为优选方案，所述荧光标记试剂标记的髓过氧化物酶抗体为单克隆抗体。

作为优选方案，所述荧光标记试剂为藻红蛋白。

作为优选方案，所述样本缓冲液为含有蛋白保护剂的磷酸盐缓冲液，是在10-100mM磷酸盐缓冲液中，分别加入1-10％质量分数的蛋白保护剂、0.01-0.5％质量分数的防腐剂混合而成。

作为优选方案，所述的表面活性剂为曲达通X-100、吐温20、布里杰-35、吐温40、吐温60、吐温80、十二烷基磺酸钠、斯盘20、烷基酚聚氧乙烯4醚、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000。

作为优选方案，所述的防腐剂为Proclin 300、叠氮钠、硫柳汞、硫酸庆大霉素。

作为优选方案，所述的蛋白保护剂为牛血清白蛋白、牛γ蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖。

制备所述试剂盒的方法，包括以下制备过程，所述制备过程不分先后：

包被有抗髓过氧化物酶的单克隆抗体的微球的制备：将未包被的微球中加入磷酸二氢钠缓冲液、N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液和碳二亚胺溶液进行活化；然后加入特异性的抗髓过氧化物酶的单克隆抗体1-125μg在4-8℃进行包被；洗涤；再加入含1-10％质量分数的动物血清蛋白的封闭液过夜封闭；最后在10-100mM磷酸盐缓冲液中避光、4-8℃存放；