[发明专利]靶向抑制HOTAIR的小RNA在制备抗前列腺癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及靶向抑制HOTAIR的小RNA在制备抗前列腺癌药物中的应用。

背景技术

近年来一些研究表明非编码RNA(ncRNAs)与多种细胞途径有关，尤其是与肿瘤相关的增殖、凋亡以及转移等过程。microRNA是其中一类大约22个碱基左右的目前研究最多的非编码RNA，可以在转录及转录后水平发挥调控作用。长链非编码RNA(LncRNA)则是另一类目前被研究较多的非编码RNA。LncRNA为一类长度大于200个碱基的非编码RNA，参与了几乎与mRNA相关的所有过程，从转录到mRNA拼接，RNA降解和翻译。LncRNA的调节异常与人类疾病关系密切，尤其是肿瘤，它可能通过调节染色质修饰从而影响表观遗传学信息和肿瘤进展。

Hox基因的反义基因间RNA(Hox transcript antisense intergenic RNA，HOTAIR)是目前研究较多的一种lncRNA，由Rinn研究小组首次发现并定义。HOTAIR长约2158个碱基，以反式沉默的方式发挥作用。有研究表明HOTAIR能重塑染色质并且促进肿瘤的转移，在多个肿瘤中，HOTAIR被证明高表达，包括胰腺癌、大肠癌、肝癌、胃癌等。HOTAIR的高表达与表观遗传学有关，在胃癌中，它通过招募多聚梳抑制复合体(Polycomb Repressive Complex 2，PRC2)，使组蛋白H3的K9和K27位点发生甲基化，从而调控靶基因的表达。而目前对于HOTAIR在前列腺癌中的研究国内尚属空白，本研究证明了HOTAIR在前列腺癌细胞中表达上调，表明前列腺癌的发生发展可能与HOTAIR有关。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向抑制HOTAIR的小RNA在制备抗前列腺癌药物中的应用。本发明包含多种序列的siRNA，这些小RNA能通过靶向抑制前列腺癌细胞中的HOTAIR表达，诱导肿瘤周期阻滞，抑制其侵袭迁移能力，进而可以应用于抗前列腺癌药物的制备。

所述靶向抑制HOTAIR的小RNA的核苷酸序列如下：

si-HOTAIR1:5’-UUUUCUACCAGGUCGGUAC-3’，如SEQ ID NO.1所示；

si-HOTAIR2:5’-AAUUCUUAAAUUGGGCUGG-3’，如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，所述的抗前列腺癌药物还可以包括制剂允许的赋形剂。

本发明的有益效果是：

本发明采用小RNA即si-HOTAIR1或si-HOTAIR2通过靶向抑制前列腺癌细胞中的HOTAIR表达，操作简单，成本较低；用量较少，50nM的转染浓度即可达到良好的抑制效果，抑制作用确切。

附图说明

图1A是HOTAIR在正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和前列腺癌细胞(PC3、DU145)中的相对表达量；图1B是用siRNA抑制HOTAIR表达后HOTAIR的表达水平。数据均来源于3次独立实验的平均值和标准差；

图2是siRNA抑制HOTAIR表达后前列腺癌细胞的周期改变；数据均来源于3次独立实验的平均值和标准差；

图3是siRNA抑制HOTAIR表达后前列腺癌细胞的侵袭和迁移能力的改变；数据均来源于3次独立实验的平均值和标准差。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明做进一步的分析。

实施例1：siRNA下调HOTAIR的表达并抑制前列腺癌细胞的生物学功能，实施方案：

1.细胞系：人正常前列腺上皮细胞RWPE-1，前列腺癌细胞系PC3，前列腺癌细胞系DU145(均来自于中科院上海细胞所)。

2.siRNA合成：siRNA均有上海吉凯生物技术有限公司化学合成。

3.实验分组：siRNA组(si-HOTAIR1、si-HOTAIR2)，对照组(si-Control)

4.细胞培养：上述三种细胞用RPMI-1640培养基，然后在RPMI-1640培养基中加入10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素，置于37℃，含5％CO₂的恒温培养箱中培养。

5.qRT-PCR检测：利用qRT-PCR技术检测3株细胞系中HOTAIR的表达水平。使用Trizol试剂提取细胞中的总RNA，使用PrimeScript反转录试剂盒和SYBR Premix Ex Taq试剂盒进行qRT-PCR分析，结果使用磷酸甘油酸脱氢酶(GAPDH)进行标准化。