[发明专利]一种降低总双乙酰的啤酒酵母的选育方法

权利要求书

1.一种降低总双乙酰（TVDK）的啤酒酵母选育方法，包括以下步骤：

1)将出发菌株发酵液稀释至适当浓度涂布于麦汁琼脂平板中，28℃恒温培养24h；

2)分离并保藏单菌落，用无菌牙签将其分别依次点接入含有500mg/LD-Val（A培养基）及50mg/L双乙酰（B培养基）的麦汁琼脂平板中，28℃恒温培养3-4d；

3)每隔24h观察菌落生长情况，对D-Val敏感的菌株具有双乙酰前体物含量低的特点，而耐高浓度双乙酰的菌株具有快速还原双乙酰的特性,因此，挑选在A培养基上生长缓慢且在B培养基上生长良好的菌株作为实验菌株进行发酵试验；

4)发酵结束后，将过滤后的发酵液及啤酒标样于60℃下水浴90min，然后置于20℃水浴锅中冷却，参照《啤酒分析方法》GB/T4928-2008蒸馏双乙酰并利用邻苯二胺—分光光度法检测样品及对照吸光值，计算得到实验菌株TVDK含量,TVDK计算公式如下：

式中：

TVDK——样品的总双乙酰含量，单位为毫克每升（mg/L）；

A₃₃₅——样品在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的样品检验的吸光度；

A_bl——蒸馏水在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的空白检验的吸光度；

A_st——1%双乙酰标准溶液在波长335nm下，用10mm石英比色皿测得的校准的吸光度;

0.625——标准品中双乙酰含量，单位为毫克每升（mg/L）。