[发明专利]一种鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗

说明书

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗。

背景技术

新城疫(Newcastle disease,ND)又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是一种主要引起禽急性、热性、败血性和高度接触性传染病，以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和死亡率，对养鸡业危害严重，OIE将其列为A类疫病，我国也将其划分为一类动物疫病。

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)感染可导致雏鸡、肉鸡出现咳嗽、喷嚏、气管啰音等症状，发育缓慢，产蛋鸡产蛋减少和产蛋品质下降等，是危害养禽业的一种主要传染病。

H9亚型禽流感虽属于低致病性禽流感，死亡率低，但临床上发病率高，主要临床表现为轻度呼吸道症状，食量减少，产蛋率可从90％降至20％以下，甚至绝产，对商品肉鸡可导致30％左右的死亡，且极易与大肠杆菌混合感染，严重影响家禽的生产性能，给养禽业带来严重的经济损失。

目前，针对以上三种疫病的防制主要依靠疫苗接种，市场上也有相应的灭活单苗和联苗，但由于存在制苗毒株免疫原性不强，联苗中各病毒抗原配比不科学而导致的疫苗制备工艺技术不稳定，对传染性支气管炎的预防免疫期较短，进而造成免疫失败现象。因此，研制一种具有广谱抗原性的鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种免疫效果良好、制备工艺稳定可靠的新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为，一种鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗，含有灭活的鸡新城疫病毒LaSota株、传染性支气管炎病毒M41株和H9亚型禽流感病毒SY株；所述H9亚型禽流感病毒SY株，其保藏编号为CGMCC No.5968。

进一步地，灭活前每0.1毫升鸡新城疫病毒La Sota株病毒液中，鸡新城疫病毒La Sota株的含量≥3×10^8.0EID₅₀；灭活前每0.1毫升传染性支气管炎病毒M41株病毒液中，传染性支气管炎病毒M41株的含量≥3×10^6.0EID₅₀；灭活前每0.1毫升H9亚型禽流感病毒SY株病毒液中，所述H9亚型禽流感病毒SY株的含量≥3×10^8.0EID₅₀。

本发明还提供了上述鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗的制备方法，用鸡胚繁殖鸡新城疫病毒La Sota株、传染性支气管炎毒M41株和H9亚型禽流感病毒SY株，分别收获相应的病毒液，分别浓缩和灭活，然后将灭活后的病毒液混合均匀，得到混合抗原液，将混合抗原液乳化，得到所述鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗。

进一步地，该混合抗原液中灭活的鸡新城疫病毒La Sota株抗原液、灭活的传染性支气管炎毒M41株抗原液和H9亚型禽流感病毒SY株病抗原液的体积比为5:6:4。

进一步地，该混合抗原液乳化的过程如下：将混合抗原液和灭菌的吐温-80按照体积比96:4混合均匀，得水相溶液；将注射用白油和司本-80按照体积比94:6混合，然后加硬脂酸铝2份，随加热随搅拌至透明为止，高压灭菌得油相溶液；将所述水相溶液和油相溶液混合乳化均匀。

进一步地，该水相溶液和油相溶液的体积为3:7。

本发明一种鸡新城疫、传染性支气管炎和H9亚型禽流感三联灭活疫苗具有如下优点：

1.选育优良的制苗毒株。鸡新城疫病毒La Sota株和传染性支气管炎病毒M41株，选用标准制苗毒株，均来源于中国兽医药品监察所，经过鉴定、扩繁、传代研究建立了生产种子批毒。H9亚型禽流感病毒SY株，是从陕西省某地区临床疑似禽流感病毒感染死亡鸡病料上分离到的一株低致病性禽流感病毒，具有稳定、良好的特异性和免疫原性，抗体产生时间短，效价高，免疫持续期长，对同源/非同源的H9亚型禽流感病毒流行株均具有较强的免疫预防作用。经哈尔滨兽医研究所国家禽流感研究中心鉴定，为H9N2亚型禽流感病毒，命名为A/Chicken/Shaanxi/SY/97(H9N2)株，分类命名：A型流感病毒H9N2亚型。保藏信息如下：

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；