[发明专利]一种溶血素融合蛋白PeLa‑EK‑10His‑SLO及其表达质粒与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种溶血素融合蛋白PeLa-EK-10His-SLO及其表达质粒与应用，属于医学微生物或生物制药领域。

背景技术

化脓链球菌是一类常见的细菌，可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。

化脓链球菌的溶血素(Streptolysin O，SLO)能够与人及其它动物的细胞膜上的胆固醇相结合，结合到细胞膜上的SLO蛋白会形成环状寡聚体，形成大的孔道，导致细胞膜溶解，另外，SLO具有极强的抗原性且易在体内残留，刺激人体及其它动物产生抗体(anti-SLO，ASO)，ASO集聚，导致变态反应。

SLO作为检测试剂，可以用来检测患者体内的ASO；其次，可以作为治疗肿瘤和杀死肿瘤细胞的药物，另外，SLO作为成孔蛋白，在动物基因工程和蛋白工程领域，用作动物细胞转基因和转蛋白工具。

目前SLO蛋白的基因工程重组技术主要存在以下缺陷：SLO蛋白对宿主具有毒性，表达量低和生产过程中SLO检测方法相对繁琐。

发明内容

本发明针对SLO重组蛋白对宿主具有毒性，表达量低和SLO蛋白检测相对繁琐的问题，提供了一种溶血素融合蛋白PeLa-EK-10His-SLO及其表达质粒与应用。

本发明的第一个目的是提供了一种溶血素融合蛋白(PeLa-EK-10His-SLO，PEHSLO)，该溶血素融合蛋白PEHSLO具有果胶酸裂解酶和溶血素蛋白活性；PEHSLO内部有肠激酶的酶切位点，可以根据需要切除果胶酸裂解酶；另外，还含有10个组氨基酸序列，为蛋白纯化提供有效的亲和基团。

所述溶血素融合蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

编码所述溶血素融合蛋白的溶血素融合基因npela-ek-10his-slo，可在大肠杆菌中高效表达溶血素融合蛋白PEHSLO。

所述溶血素融合基因npela-ek-10his-slo的核苷酸序列，在本发明的一种实施方式中，如SEQ ID NO.2所示。

所述npela-ek-10his-slo的核苷酸序列，在本发明的一种实施方式中，使用了曲霉果胶酸裂解酶酶活性区pela序列、大肠杆菌肠激酶位点序列、10个组氨基酸和化脓链球菌溶血素slo活性区与抗原区序列。而且曲霉果胶酸裂解酶酶活性区pela序列和化脓链球菌溶血素slo活性区与抗原区序列，依据大肠杆菌背景下的密码子优化和增加蛋白表明基团亲水性等原理，进行了优化设计。

本发明的第二个目的是提供一种表达所述溶血素融合蛋白PEHSLO或使用所述npela-ek-10his-slo融合基因构建的表达质粒。

所述质粒，在本发明的一种实施方式中，为npela-ek-10his-slo-pET-28a(+)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明的第三个目的是提供一种表达所述溶血素融合蛋白PEHSLO的基因工程菌或转基因细胞系。

所述基因工程菌，在本发明的一种实施方式中，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，pET-28a(+)为载体，表达核苷酸序列为SEQ ID NO.2的溶血素融合基因npela-ek-10his-slo。

本发明的第四个目的是提供一种检测溶血素SLO的方法，所述方法是融合表达果胶酸裂解酶和溶血素蛋白，通过检测果胶酶活性定性和定量分析溶血素SLO。所述融合表达是融合表达编码氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的基因。

本发明的第五个目的是提供一种提高SLO可溶性表达的方法。所述方法是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，pET-28a(+)为载体，表达核苷酸序列为SEQ ID NO.2的溶血素融合基因npela-ek-10his-slo。

本发明还要求保护所述溶血素融合蛋白PEHSLO在SLO蛋白生产、SLO检测、SLO抗体制品制备、抗癌药物生产、基因工程或蛋白工程等领域的应用。

本发明的有益效果：