[发明专利]以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法

权利要求书

1.以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，该方法首先是纯化凹土，其次将凹土与海藻酸钠、明胶混合成复合壁材，接着将已制备好的益生菌菌悬液在一定的条件下与上述复合壁材混合均匀，然后缓慢滴入CaCl₂中固化成型，最后真空冷冻法干燥，获得益生菌微胶囊；其特征是该制备方法包括以下具体步骤：

第一步凹土的纯化：将凹土采用电导率低于5μs/cm的去离子水浸泡20~28h，搅拌器以1000~1500rpm转速搅拌20~28h，静置分层，取中间层凹土悬液，以其5~20%的量继续加入上述去离子水，同样操作，重复2~3次，于105~120℃烘干，研磨，过筛，取200目至140目细土备用；

第二步益生菌菌悬液的制备：将枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、粪链球菌、地衣芽孢杆菌或酵母菌培养至对数生长期后期，收集菌体，采用无菌生理盐水洗涤去培养基，将菌体悬浮于pH为2~9的磷酸盐缓冲体系中，并将浓度调节至10⁹~10¹⁰CFU/ml备用；

第三步壁材与益生菌混合溶液的制备：将5-50g的海藻酸钠、0-50g的明胶和1-40g的凹土悬浮至10L的菌悬液中，混合均匀；

第四步微胶囊固化成型：将上述壁材与益生菌的混合溶液缓慢滴加入离子强度为0.01-2mol/L、pH5-8磷酸盐缓冲液配制的浓度为1-50g/L的CaCl₂中，于20-40℃固化成型10-100分钟，获得粒径大小为100-2000μm的微胶囊粒子；

第五步真空冷冻干燥法获得益生菌微胶囊制剂：真空冷冻干燥法条件为：上述微胶囊粒子于-40~-75℃预冻2~3小时，迅速移入冷冻干燥机冷冻干燥20~28小时，使微囊制剂含水量≤2%，检测活菌剂中活菌数为10⁹~10¹²CFU/g。

2.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是枯草芽孢杆菌培养条件是：培养基为葡萄糖5g、蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠5g，蒸馏水1000ml，pH7.2；35℃振荡培养18h，摇床转速为180rpm。

3.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是双歧杆菌培养条件是：培养基为蛋白胨15g，葡萄糖15g，酵母膏4g，牛肉膏4g，NaCl 5g，Na₂HPO₄ 2.5g，蒸馏水1000ml，pH7；35℃静置培养22小时。

4.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是嗜酸乳杆菌培养条件是：培养基为蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，柠檬酸氢二铵2g，葡萄糖20g，吐温-80 1ml，CH₃COONa·3H₂O 5g，K₂HPO₄·3H₂O 2g，MgSO₄·7H₂O 0.58g，MnSO₄·H₂O 0.25g，蒸馏水1000ml，调pH6.2-6.4；37℃静置培养20小时。

5.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是嗜热链球菌培养条件是：培养基同嗜酸乳杆菌；40℃静置培养20小时。

6.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是保加利亚乳杆菌培养条件是：培养基同嗜酸乳杆菌；37℃静置培养20小时。

7.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是鼠李糖乳杆菌培养条件是：培养基同嗜酸乳杆菌；37℃静置培养20小时。

8.根据权利要求1所述的以海藻酸钠、明胶复合凹土制备益生菌微胶囊的方法，其特征是粪链球菌培养条件是：培养基为蛋白胨2g，牛肉膏2g，乳糖2g，蒸馏水1000ml，pH6.8；37℃振荡培养6h，摇床转速为100rpm。