[发明专利]一种抗原性增强的肿瘤细胞及其构建方法有效
申请号: | 201510270602.3 | 申请日: | 2015-05-22 |
公开(公告)号: | CN104928253B | 公开(公告)日: | 2018-08-21 |
发明(设计)人: | 卢戌;刘静维;王跃;杨照敏 | 申请(专利权)人: | 北京康爱瑞浩生物科技股份有限公司空港分公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/63;A61K35/13;A61P35/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 101300 北京市顺义区*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 抗原性 增强 肿瘤 细胞 及其 构建 方法 | ||
1.一种抗原性增强的肿瘤细胞,其特征在于:包含erbB-1基因和Rae-1基因;其中,所述erbB-1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述Rae-1基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。
2.根据权利要求1所述的抗原性增强的肿瘤细胞,其特征在于:所述肿瘤细胞是直肠癌细胞、原发性肝癌细胞、胃癌细胞或腺癌细胞。
3.权利要求1或2所述抗原性增强的肿瘤细胞的构建方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)从离体肿瘤组织分离、纯化肿瘤细胞,将收集的细胞用RPMI-1640培养基重悬后接种到细胞培养板中;
(2)基因转染:细胞贴壁后,将含有特定基因erbB-1和Rae-1的慢病毒加入到细胞培养板中进行转染;
(3)将基因转染后的肿瘤细胞进行体外培养,用胰蛋白酶消化后,进行细胞传代建立肿瘤细胞系。
4.一种包含erbB-1基因和Rae-1基因的重组质粒,其特征在于:所述重组质粒为pEF1alpha-IRES-erbB-1-Rae-1Vector;
所述pEF1alpha-IRES-erbB-1-Rae-1Vector是通过如下方法制备获得的:
用erbB-1基因替换pEF1alpha-IRES Vector上XbaⅠ和SalⅠ之间的DNA片段,得到pEF1alpha-IRES-erbB-1;
用Rae-1基因替换pEF1alpha-IRES-erbB-1上SalⅠ和NotⅠ之间的DNA片段,得到所述pEF1alpha-IRES-erbB-1-Rae-1Vector;
所述erbB-1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述Rae-1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.权利要求1或2所述的抗原性增强的肿瘤细胞在制备用于高效致敏DC细胞的生物制剂中的用途。
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