[发明专利]桑黄菌丝体多糖、制备方法及其在抗肿瘤的应用

说明书

技术领域

本发明属于天然产物开发领域，涉及桑黄菌丝体多糖在抗肿瘤药物中的应用，具体是桑黄菌丝体多糖的制备及结构和其可抑制肿瘤细胞的生长。

背景技术

桑黄(Phellinus igniarius)作为珍稀的药用真菌，多糖为其主要活性成分，且由于其良好的抗肿瘤、抗氧化和增强机体免疫功能的作用而得到大量的关注。

由于桑黄子实体特殊的生长环境和外部环境条件的限制，使得自然形成的桑黄子实体很少，同时也给人工栽培加大了难度，造成桑黄资源的开发研究缓慢。经研究发现，桑黄菌丝体多糖在抗肿瘤方面和桑黄子实体具有相当的活性。因此采用液体发酵，通过摇瓶发酵得到桑黄(P.igniarius)菌丝体，并对桑黄菌丝体粗多糖进行分离纯化，得到纯度较高的桑黄菌丝体多糖。同时对其进行活性研究和结构分析，使其能够更好地应用于保健品、抗癌药物治疗的开发。

本发明所涉及的桑黄(Phellinus igniarius)菌丝体均一多糖的结构，迄今未见相关报道。

发明内容：

本发明提供桑黄菌丝体均一多糖的制备及结构分析，同时提供了桑黄菌丝体均一多糖的抗肿瘤活性研究。

本发明所述的桑黄菌丝体均一多糖是从桑黄菌丝体中获得，其一级结构重复单元如通式(1)：

其中，Glc代表葡萄糖，Rha代表鼠李糖，1,3,4,6代表取代基的位置。

本发明的桑黄菌丝体均一多糖的制备方法，按照下述步骤进行：

1)桑黄Phellinus igniarius菌种，菌株编号为5.95，购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，桑黄菌丝体摇瓶发酵显示：在接种量10％，温度28℃，转速135r/min，培养8天，得到桑黄菌丝体干重为4.53g/L。

2)桑黄菌丝体经热水提取，乙醇分级沉淀得到桑黄菌丝粗多糖IPS30、IPS60和IPS80。

3)桑黄菌丝体粗多糖经DESE-52纤维素离子交换柱分离和Sephacryl S-400凝胶柱纯化后得到桑黄菌丝体均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4，且经HPSEC-RI-MALLS检测分子量分别为34.1kDa、17.7kDa、15.1kDa和21.7kDa。

4)桑黄菌丝体均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的红外光谱分析表明四种均一多糖均为α型D-葡萄吡喃糖。

5)桑黄菌丝体均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的气相色谱显示IPSW-1、IPSW-2和IPSW-3都只包含葡萄糖，而IPSW-4含有鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，摩尔比为1.29:1.21:1.0:43.86:1.86。

6)桑黄菌丝体均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和核磁共振分析显示：IPSW-1主链为Glc(1→6)和Glc(1→3,4)，非还原性末端为Glc；IPSW-2主链为Glc(1→6)、Glc(1→3,4)和Glc(1→3，6)，端基为Glc；IPSW-3主链为Glc(1→6)、Glc(1→3,4)和Glc(1→3，6)，非还原性末端为Glc；IPSW-4主链为Glc(1→6)和Glc(1→3,4)，支链为Rha(1→2)，非还原性末端为Glc。

7)MTT试验结果显示：桑黄菌丝体均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4对体外培养肝癌细胞HepG2和肠癌细胞SW480的增殖具有显著的抑制作用。

包含本发明化合物的药物可以作为单独的抗肿瘤药物使用，也可以与其它药物联合使用。

包含本发明化合物的药物可以制成各种药物剂型使用。

附图说明

图1为均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的红外光谱图。

具体实施方式

实施例1：桑黄菌丝体的发酵

种子液培养 250mL摇瓶中装新鲜PDB培养基100mL，Phellinus igniarius NO.5.95(CGMCC)菌种接活化后的平板母种5块，每块0.25cm²。置于28℃、135r/min恒温摇床培养振荡8天。