[发明专利]一种可溶性表达马红球菌致病基因VapA蛋白的方法有效
| 申请号： | 201510273219.3 | 申请日： | 2015-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN104862331A | 公开（公告）日： | 2015-08-26 |
| 发明（设计）人： | 孙凌霜;龚凤平;李守军 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/31;A61K39/02;A61P31/04;C07K16/12 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 可溶性 表达 球菌 致病 基因 vapa 蛋白 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种可溶性表达马红球菌致病基因VapA蛋白的方法，其特征在于，扩增VapA基因，并克隆到pMAL-c5x载体上，构建表达载体pMAL-VapA，将pMAL-VapA转化至原核表达菌，通过IPTG在20℃下诱导获得可溶性VapA蛋白；具体包括以下步骤：
S1. 重组质粒pMAL-VapA的构建：用SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所述引物扩增VapA基因，将扩增产物与pZeroBack/blunt载体相连构建质粒pZeroBack-VapA；最后将pMAL-c5x和测序正确的pZeroBack-VapA进行双酶切后构建表达载体pMAL-VapA；
S2. 将pMAL-VapA 转化入BL21菌中，测序鉴定为阳性之后，将菌液接种于培养基中，培养至OD600值为0.5～0.7后，加入IPTG诱导后，离心重悬菌体，破碎菌体，收集上清，获得可溶性VapA蛋白；
所述VapA基因的序列为GenBank JN990991.1所示。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，IPTG诱导的浓度为0.3～0.7mM，诱导时间为8～12h。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，IPTG诱导的浓度为0.7mM，诱导时间为8h。
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