[发明专利]抗肝细胞衰老的PCL‑PLA组织工程复合支架的制备和应用有效
申请号: | 201510273322.8 | 申请日: | 2015-05-26 |
公开(公告)号: | CN104826162B | 公开(公告)日: | 2017-05-03 |
发明(设计)人: | 关燕清;杨润财 | 申请(专利权)人: | 华南师范大学 |
主分类号: | A61K38/18 | 分类号: | A61K38/18;A61L27/22;A61L27/54 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人: | 陈卫 |
地址: | 510631 广东省广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 肝细胞 衰老 pcl pla 组织 工程 复合 支架 制备 应用 | ||
1.一种抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,是以支架材料PCL-PLA为基础,光接枝聚丙烯胺、IGF和TNF-a进行协同共修饰得到;具体是由如下步骤制备得到:
S1.利用PBS溶液分别溶解IGF和TNF-a,得到游离IGF溶液和游离TNF-a溶液;
S2.在游离IGF溶液和游离TNF-a溶液中分别加入DMF/PBS溶液进行反应,再分别加入含N-琥珀亚酰胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液进行反应,得到光活性IGF溶液和光活性TNF-a溶液;
S3.把DMF/PBS溶液溶解的聚丙烯胺与叠氮苯胺盐酸盐进行反应,得到光活性PAAm;
S4.剪裁支架材料PCL-PLA,PBS清洗后,加入光活性PAAm进行光接枝,再加入光活性IGF溶液和光活性TNF-a溶液,进行光接枝,得到PCL-PLA组织工程复合支架。
2.根据权利要求1所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,由如下步骤制备得到:
S1.利用PBS溶液分别溶解IGF和TNF-a,得到游离IGF溶液和游离TNF-a溶液,分别过滤灭菌;
S2.共固定IGF和TNF-a的制备
S21.步骤S1所述游离IGF溶液和游离TNF-a溶液中分别加入体积比4:1的DMF:PBS,磁力冰浴搅拌反应后,超滤;
S22.避光环境下将S21处理后的IGF与TNF-α分别加入含N-琥珀亚酰胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液中,磁力冰浴搅拌反应后,分别超滤纯化叠氮苯基衍生物,冷冻干燥,得到光活性IGF溶液和光活性TNF-a溶液;
S3.共固定聚丙烯胺的制备
S31.利用体积比4:1的DMF:PBS溶液溶解聚丙烯胺,磁力冰浴搅拌反应后超滤;
S32.避光环境下,把S31处理后的聚丙烯胺与叠氮苯胺盐酸盐按物质的量1:100加入棕色瓶进行反应,磁力冰浴搅拌反应后,超滤纯化叠氮苯基衍生物,冷冻干燥,得到光活性PAAm;
S4.支架材料的制备
S41.将支架材料PCL-PLA剪裁成1厘米见方大小,用灭菌的PBS清洗后,加入光活性PAAm,冷冻干燥后,进行光接枝;
S42.接枝好的材料再加入光活性IGF溶液和光活性TNF-a溶液,冷冻干燥后,进行光接枝,得到PCL-PLA组织工程复合支架。
3.根据权利要求2所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,步骤S1所述游离IGF溶液和游离TNF-a溶液的浓度均调整为1 ng/μl;步骤S1所述过滤使用的是孔径为10000 Mw的过滤膜。
4.根据权利要求2所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,步骤S21、S22、S31或S32所述磁力冰浴搅拌是加入磁力搅拌子,放入磁力搅拌器内冰浴搅拌48 h使其充分反应;
步骤S21、S22、S31或S32所述超滤是用超滤离心管,在4000 r/min的转速下,超滤离心6 h。
5.根据权利要求2所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,步骤S22所述DMF/PBS溶液的pH为7.4,DMF与PBS体积比为4:1。
6.根据权利要求2所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,步骤S22所述IGF:含N-琥珀亚酰胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液的物质的量比为1:100;
所述TNF-α:含N-琥珀亚酰胺的二甲基酰胺DMF/PBS溶液的物质的量比为1:100。
7.根据权利要求2所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架,其特征在于,步骤S22所述光活性IGF溶液和光活性TNF-a溶液在使用前,用无菌的PBS调至1 ng/μl的浓度;
步骤S32所述光活性PAAm在使用前,用无菌的PBS调至1 ng/μl的浓度;
步骤S4所述支架材料PCL-PLA与光活性PAAm的用量比为40 μl/cm2。
8.权利要求1至7任一所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架在制备抗细胞衰老制剂方面的应用。
9.权利要求1至7任一所述抗肝细胞衰老的PCL-PLA组织工程复合支架在作为肝组织工程材料方面的应用。
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