[发明专利]一种马铃薯化学消毒组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种马铃薯化学消毒组培方法，属生物技术领域。

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum)属茄科多年生草本植物，是一种无性繁殖的作物，在我国种植非常广泛。马铃薯含有人体必需的碳水化合物、蛋白质、维生素、膳食纤维等全部七大类营养物质，是现代人的理想食物之一。现在，它已经成为世界第四大粮食作物。但是，在生产中由于常年连作，种植环境的污染，使得各种真菌类、细菌类、病毒类病害侵染马铃薯，其中真菌类和细菌类病害可以用化学方法防治，但病毒类病害不能用化学药剂防治。植株体感染病毒后还会在体内增殖、运转和积累，引起种性退化，使得其产量和品质逐年下降，严重的甚至绝收。解决这一问题的有效措施就是对其进行茎尖培养脱除病毒，并进一步生产脱毒种薯。我国从20世纪70年代开始建立了马铃薯脱毒及种薯生产体系，利用植物组织培养技术生产大量的脱毒组培苗，并进一步在网室内生产马铃薯脱毒种薯，此项技术在解决种薯种性退化方面取得了较好的成效。

但是，如何大幅度地降低马铃薯脱毒组培苗的生产成本，为大面积推行脱毒种薯的应用、提高马铃薯的单产水平和整体推进马铃薯产业具有重大的现实意义。常规的马铃薯茎尖组织培养是在无菌条件下进行的，组织培养的各个环节均需配置相应的设施设备及常规耗材，成本较高，能源消耗较大，同时整个流程要在无菌条件下操作，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，获得既保证马铃薯脱毒种苗正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。

发明内容

本发明的目的是提供一种马铃薯化学消毒组培方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种马铃薯化学消毒组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、茎尖诱导增殖培养、壮苗培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的不锈钢盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L乳酸链球菌素+100mg/L丙酸钙的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：茎尖诱导增殖培养基为MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；壮苗培养基为：MS+0.1～0.5mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.2～0.5mg/L NAA+50～100mg/L次氯酸钠+2～5mg/L青霉素+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸钠+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述6-BA，指6-苄氨基嘌吟；所述NAA，指〆-萘乙酸；配制培养基时，先称各培养基配方中蔗糖和琼脂粉，加培养基总体积1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；

3.茎尖诱导增殖培养：取发芽种薯的带芽块茎进行变温处理，每天40℃处理4h，25℃处理20h，如此处理4周；从顶芽或侧芽取茎尖，先剥去大叶片，用自来水冲洗20～30min，在体积比为75％的酒精中浸泡30s，用重量比为0.1％的升汞溶液消毒10min，取出后，用无菌水冲洗3次，然后在无菌条件下剥取带1～2个叶原基、长0.3～0.7mm的茎尖，接种于茎尖诱导增殖培养基上培养30d，获得大量的丛生芽；将丛生芽切成长1.0～1.5cm、带单个腋芽的茎段，再次转入诱导增殖培养基中，逐步发育成不具根的幼苗，每30d转接一次，大量增殖不具根的幼苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为2000～3000lx；

4.壮苗培养：将增殖后的不具根的幼苗接种到壮苗培养基上，培养4周成为不具根的小苗；培养室温度为26℃，光照12h，光照强度为2000～3000lx；

5.生根培养：取壮苗培养至6～8cm高、茎粗不小于0.3cm的不具根的小苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为25℃，光照16h，光照强度为2000～3000lx；