[发明专利]一种合成替度鲁肽的方法

权利要求书

1.一种合成替度鲁肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、在Ser侧链上、Asp侧链上、Glu侧链上、Asn侧链上、Thr侧链上、Arg侧链上、Trp侧链上、Gln侧链上、Lys侧链上偶联有保护基的多肽片段3，所述树脂载体为Trityl-Cl类树脂或羟基类树脂；

步骤2、将多肽片段3的N端和多肽片段2的C端偶联，偶联后脱除多肽片段2的N端保护基，得到多肽树脂Ⅰ；

步骤3、将多肽片段1的C端和多肽树脂Ⅰ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段1的N端保护基，得到替度鲁肽树脂；

步骤4、替度鲁肽树脂酸解脱除C端树脂和所有保护基得到替度鲁肽粗品，粗品纯化转醋酸盐，获得替度鲁肽成品，所述酸解采用由体积百分比为80-95％的TFA、体积百分比为1-10％的EDT、余量为水组成的混合酸解液酸解。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述合成多肽片段1具体为：

Fmoc-His(Trt)-OH或Boc-His(Trt)-OH与Gly-OBzl.HCl和三乙胺，在HOSu和DIC的作用下缩合形成Fmoc-His(Trt)-Gly.OBzL或Boc-His(Trt)-Gly.OBzL，然后钯碳催化氢解，得到Fmoc-His(Trt)-Gly或Boc-His(Trt)-Gly。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述合成多肽片段2具体为：

Fmoc-Asp(OtBu)-OH与Gly-OBzl.HCl和三乙胺，在HOSu和DIC的作用下缩合形成Fmoc-Asp(OtBu)-Gly.OBzL，然后钯碳催化氢解，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Gly。

4.根据权利要求2或3所述方法，其特征在于，所述HOSu、DIC、保护氨基酸、三乙胺和Gly-OBzl.HCl的摩尔比为1：1：1：1：1。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤1所述合成多肽片段3具体为：

在偶联试剂存在下，将Fmoc-Asp(OtBu)-OH与树脂载体偶联后脱Fmoc保护基得到H-Asp(OtBu)-树脂载体，然后采用活化试剂和缩合试剂，按照SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将剩余氨基酸或保护氨基酸进行延伸偶联，脱除N端带有的Fmoc保护基得到多肽片段3，即Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gln(Trt)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Ile-Thr(tBu)-Asp(OtBu)-树脂载体。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述偶联试剂为N,N-二异丙基乙胺、N,N-二异丙基碳二亚胺/1-羟基苯并三唑/4-N,N-二甲基吡啶两种之一。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。

8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述活化试剂为1-羟基苯并三唑或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。