[发明专利]一种金叶蜀桧初代组培方法

说明书

技术领域

本发明属于农业技术领域，具体涉及一种金叶蜀桧初代组培方法。

背景技术

金叶蜀桧是新引进的彩叶植物，由于四季均为黄色，色彩鲜明，在园林绿化中具有很重要的作用。金叶蜀桧一般采用种子播种、扦插方法繁殖，但种子繁殖容易发生变异，扦插繁殖的穗源较少，不能快速大量繁殖，所以用组织培养的方法是金叶蜀桧快繁新途径。

在金叶蜀桧的初代组织培养过程中，如何能够使金叶蜀桧的初代培养能顺利的进入下一阶段培育是非常重要的，由于金叶蜀桧为外来树种，以往对它的繁殖还没有报道。

发明内容

发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种金叶蜀桧初代组培方法，使金叶蜀桧能快速、大量的形成分枝，以便进入继代培养过程。

技术方案：为实现上述技术目的，本发明提出的一种金叶蜀桧初代组培方法，包括如下步骤：

(1)培养基的制作：配制MS培养基的母液，根据配方制作MS+0.05～0.4mg/L NAA+0.1～2.0mg/L6-BA+0.2～0.8wt％琼脂+3wt％蔗糖的培养基，分装灭菌备用；

(2)准备外植体； 

(3)外植体的消毒：

(5)接种消毒：用酒精棉花擦拭手掌，超净工作台和桌面上的器皿；

(6)接苗：用镊子夹出冲洗后的外植体，剪去外植体的旧伤口，换成新伤口，将外植体依次插入装有培养基的培养瓶中；

(7)培养：将接种好的外植体统一放到试管架中，推入培养室培养，等待其发芽生长。

优选地，步骤(2)中，准备外植体的步骤为：在晴天早上剪去不带芽的外植体，用洗衣粉浸泡过后用流水冲洗2～3小时。

步骤(3)中，外植体的消毒方法为：用配制0.1～0.3wt％的升汞将外植体浸泡5～8min，用无菌水冲洗5次以上。

更优选地，步骤(1)中，培养基的配方为MS+0.1～.0.3mg/L  NAA+0.5～1mg/L6-BA+0.4～0.6wt％琼脂+3wt％蔗糖。

最优选地，步骤(1)中，培养基的配方为MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+0.6wt％琼脂+3wt％蔗糖。

组织培养在离体培养条件下，不同植物以及同种植物不同部位的组织细胞对营养要求不同，只有满足了他们各自的特殊要求，才能更好地生长发育。掌握培养基的配制及筛选方法是取得组培成功的关键环节之一。由于本发明属于外来物种，因此在研究其组培方法时可参考的资料不多，必须通过试验来逐一解决，关键要解决外植体的取材部位、培养基的选择以及培养条件等因素。本发明通过长期的探索试验，发现通过采用本发明的外植体的取材方法以及选择MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+0.6wt％琼脂+3wt％蔗糖，可以使金叶蜀桧能快速、大量的形成分枝，以便进入继代培养过程，同时不会出现玻璃化、褐化等现象。

附图说明

图1为利用本发明培养的成活的外植体的图片。

具体实施方式

本发明提出了一种金叶蜀桧初代组培方法，包括如下步骤：

(1)外植体的准备：在晴天早上剪去不带芽的外植体，用洗衣粉浸泡过净后流水冲洗2小时；

(2)外植体的消毒：用配制0.1％的升汞将外植体浸泡5mins，用无菌水冲洗5次以上；

(3)接种消毒：用酒精棉花擦拭手掌，超净工作台和桌面上的器皿；

(4)接苗：用镊子夹出冲洗后的外植体，剪去外植体的旧伤口，换成新伤口，将外植体依次插入装有培养基的培养瓶中；其中，培养基的制作方法为：配制MS培养基的母液。根据配方制作MS+0.05～0.4mg/L NAA+0.1～2.0mg/L6-BA+0.2～0.8wt％琼脂+3wt％蔗糖的培养基，在每个培养瓶内倒入25ml，灭菌备好；

(5)培养：将接种好的外植体同一放到试管架中，推入培养室培养，等待其发芽生长。其发芽生长后的图如图1所示。

下面通过具体的实施例详细说明本发明。

实施例1 6-BA浓度对初代培养效果的影响。

在初代培养时，将6-BA浓度设为0、0.05、0.2、1.0mg/L四个浓度梯度，使用MS培养基，加入6wt％琼脂和3wt％蔗糖，进行初代组培，每组设10个平行实验，结果如下表所示：

表1 不同浓度的6-BA对初代培养效果的影响

从结果中可以看出，当6-BA浓度为1.0mg/L时，平均再生鳞叶数占原有鳞叶数的百分比最高，效果最好。