[发明专利]与生殖支原体粘附素蛋白MgPa特异性结合的十二肽及其用途

说明书

技术领域

本发明提供了一种能够与生殖支原体粘附素蛋白(MgPa)特异性结合的十二肽，属于生物工程技术领域。

背景技术

支原体介于病毒与细菌之间，缺乏细胞壁、呈高度多型性，可通过除菌过滤器，可在无细胞的培养基中繁殖，在固体培养基平板上培养可成“油煎蛋”样的独特菌落，是广泛存在于自然界的条件致病微生物。生殖支原体(Mycoplasma genitalium，Mg)是支原体属中的一种，首次发现是从一名非淋菌性尿道炎患者尿道分泌物中分离出的。临床调查研究表明，女性Mg感染可引起宫颈炎，盆腔炎，不孕等；而男性感染则可引起急慢性非淋菌性尿道炎(NGU)，不育等；更值得注意的是，随着更深入的研究显示，Mg感染与人类免疫缺陷疾病(HIV)的机会感染密切相关，能选择性的激活CD4+T细胞促使HIV的复制，是HIV的协同因子之一。

病原体和宿主细胞膜上相应受体的结合是病原体感染宿主的第一步，对其能否感染宿主细胞至关重要。有研究表明，Mg必须先黏附于泌尿生殖道或呼吸道黏膜细胞才能感染宿主并定植于感染部位或侵入细胞内，失去黏附能力的突变株则缺乏感染能力。支原体缺乏细胞壁，但Mg细胞膜上存在较多的外膜蛋白，Mg通过酰基锚定在其细胞膜上的膜蛋白介导Mg定植到宿主细胞表面而感染致病。Burgos等研究表明Mg膜蛋白能刺激机体发生持续的免疫反应。Mg通过粘附感染宿主细胞最主要的外膜蛋白为生殖支原体粘附素蛋白(MgPa)，而自发性的无细胞黏附活性的Mg突变株则缺乏MgPa。MgPa的基因编码含有三个操纵子分别为mg190(mgpA)，mg191(mgpB)和mg192(mgpC)，其中编码MgPa的基因为mgpB，由其编码的MgPa蛋白主要集中在Mg烧瓶状的顶尖部位，这一特殊位置对Mg的粘附感染宿主起至关重要的作用。Mernaugh等研究表明Mg可凭借其尖形结构主动靠近并黏附于人胚肺成纤维细胞表面，并通过微管将核酸、酶等输入宿主细胞内，将某些酶解产物吸入细胞内供Mg利用，由此影响宿主的代谢及生物合成。

近年来，Mg感染率呈现上升趋势，但目前仍然没有满足临床需要的药物和疫苗可供使用，临床上也急需安全、有效、实用药物以用于治疗和预防Mg的感染。

发明内容

本发明解决了背景技术中的不足，提供了一种能够与生殖支原体粘附素蛋白MgPa特异性结合的十二肽，所述多肽为A或B中的任意一种：

A：由Asp-Trp-Ser-Ser-Trp-Val-His-Arg-Asp-Pro-Gln-Thr所示的氨基酸序列组成的十二肽，如SEQ ID NO：1所示。

B：在A所述的氨基酸序列中经过取代1-5个氨基酸且具有与生殖支原体MgPa特异性结合活性的由A所衍生的十二肽；具体的取代方式包括如下五种：第二位的Trp被Arg取代，第四位的Ser被Gln取代，第六位的Val被Gly取代，第七位的His被Tyr取代，第十二位的Thr被Ser取代。

在B中，具体的十二肽包括以下五种，其氨基酸序列分别为：Asp-Arg-Ser-Ser-Trp-Val-Tyr-Arg-Asp-Pro-Gln-Thr，如SEQ ID NO：2所示；Asp-Arg-Ser-Gln-Trp-Gly-Tyr-Arg-Asp-Pro-Gln-Ser，如SEQ ID NO：3所示；Asp-Trp-Ser-Gln-Trp-Gly-Tyr-Arg-Asp-Pro-Gln-Ser，如SEQ ID NO：4所示；Asp-Trp-Ser-Gln-Trp-Val-Tyr-Arg-Asp-Pro-Gln-Ser，如SEQ ID NO：5所示。

将本发明中筛选到的阳性噬菌体扩增后用ELISA测定其能否与MgPa发生特异结合。ELISA结果说明：表达有A或B中所述氨基酸序列的噬菌体与MgPa的结合能力均较高(OD₄₅₀值大于1.5)，说明以上五种噬菌体表面插入的十二肽能特异性识别MgPa重组蛋白，为与MgPa重组蛋白特异结合的十二肽。

为进一步证实以上五种阳性噬菌体克隆能与MgPa重组蛋白发生特异性结合，将阳性噬菌体进行竞争抑制性ELISA试验。结果表明以上五种噬菌体与MgPa重组蛋白发生的特异性结合能不同程度的被不同稀释度的抗MgPa抗体抑制，且随着抗体稀释比例的升高其抑制效果相应的下降。这些结果说明上述阳性噬菌体与MgPa重组蛋白的特异结合能被MgPa的抗体所抑制，进一步说明了阳性噬菌体克隆能与MgPa重组蛋白发生特异性结合。