[发明专利]一种用于制备CART细胞的具有高效转染能力和生物学活性的慢病毒

说明书

本发明提供了一种用于制备CAR‑T细胞的具有高效转染能力和生物学活性的慢病毒，该慢病毒可作为CAR‑T淋巴细胞治疗中的外源基因的载体，可以更高的效率感染T淋巴细胞，将外源基因导入到T淋巴细胞中，从而对T淋巴细胞进行基因组修饰，而且在此过程中同时起到对T淋巴细胞活化的作用，极大的简化了肿瘤免疫治疗的过程。

技术领域

本发明属于医学生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于制备CART细胞的具有高效转染能力和生物学活性的慢病毒。

背景技术

癌症一直是困扰人类的巨大难题，世界卫生组织官方网站上指出，全球每年新发现肿瘤患者将每年1000万增加到1500万。2014年初发布的《2013中国肿瘤登记年报》显示，我国每年新发肿瘤病例约为312万例，平均每天8550人意味着每分钟就有6人就诊断为恶性肿瘤，这些数据都表明，癌症依然是威胁健康的一大杀手。

多年来，癌症治疗的方法主要是手术、化疗和放疗，对肿瘤患者的临床治疗有效率仍旧很低，据统计，同一种抗肿瘤药物的有效率仅为25％。针对同一种肿瘤，用同样的药、标准剂量的治疗方法，在不同病人身上所起的疗效及毒副作用却有很大的差异。造成这种结果的主要原因在于，肿瘤是一种多病因、异质性的疾病。过去十年来，依赖于患者个体生物标志物的肿瘤个性化治疗正在逐渐取代依据传统经验的治疗模式，并展现出优越的疗效和广阔的前景，如伊马替尼()和曲妥珠单抗()。

免疫疗法是继手术、化疗、放疗和靶向疗法后出现的一种新型疗法，被称为治疗癌症的“第五大疗法”。它是利用患者自身免疫系统的力量来抵抗癌症；癌症免疫疗法主要包括过继性细胞治疗、免疫调节剂、肿瘤疫苗以及免疫结合点阻断治疗等。虽然有关免疫治疗的研究早在30年前就已开展，最近两年《细胞》、《科学》、《自然》等国际顶级期刊刊出多项该领域的突破研究成果，制药巨头也不断推出此类型的重磅疗法。2014年12月6号-9号在旧金山举行的美国血液学会年会(ASH)上，癌症免疫疗法可谓是赚足了眼球，CAR-T疗法更是备受关注。

现有技术中的肿瘤免疫疗法的缺点如下：

1)操作繁琐。目前在CAR-T治疗过程中，T淋巴细胞的活化与T淋巴细胞的感染是两个分开的过程，需要先活化再感染。操作频繁，而繁琐的操作不仅仅是对人力资源的浪费，更重要的是，增加了对T淋巴细胞污染的机会，更加会影响T淋巴细胞的状态，而这些都会降低CART淋巴细胞的疗效，甚至会对CART淋巴细胞疗法引入安全隐患。

2)目前活化T淋巴细胞的方法主要是使用包被有抗体的磁珠与T淋巴细胞共培养，但该方法有着如下缺陷：

1.成本太高。包被抗体的磁珠制作繁琐。首先需要有表达纯化的抗体，其次需要将其偶联到磁珠。并且，整个操作过程均需要符合医疗级洁净程度。无论是自行制作，还是购买商业化的产品，成本均十分高昂。

2.操作繁琐。在培养过程中，需要先对抗体磁珠在医疗洁净程度下进行清洗操作，之后才能按照比例加入到T淋巴细胞中。除了对环境要求高导致的成本问题，整个操作过程也需要很多精力。

3.活化后需将磁珠彻底去除。由于磁珠对于人体免疫系统来说是异物，在CART淋巴细胞制备完成后，需要将其彻底去除。在去除过程中，需要用磁极对细胞进行处理，有可能对细胞造成一定的伤害，并且会损失部分CART淋巴细 胞。