[发明专利]富含四种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法

权利要求书

1.一种富含四种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在于：包括下述步骤：

第一步，液体发酵

将编号为CICC 20906、CICC 20191、 CICC 20903、CICC 20887和CICC 20192五种谷氨酸棒杆菌中的任意四种按1:1:1:1比例混合后先进行种子培养和液体发酵；将编号为CICC1257的近平滑假丝酵母进行种子培养，然后接入到谷氨酸棒杆菌发酵液中混菌发酵，得到混菌发酵液备用；

将编号为CICC20022或CICC20038的植物乳杆菌单独发酵，发酵液备用；

将编号为CICC23413或CICC20443的纳豆芽孢杆菌单独发酵，发酵液备用；

第二步，制备发酵醪液

将第一步制得的发酵液按谷氨酸棒杆菌和近平滑假丝酵母混菌发酵液10~60份，植物乳杆菌发酵液0~30份或/和纳豆芽孢杆菌发酵液0~30份混合，用Ca(OH)₂调节pH值至中性，得到发酵醪液备用；

第三步，固态发酵

按重量比将100~150份豆粕、棉粕、菜籽粕和花生粕中的一种或两种以上物料与5~10份糖蜜混合，得到固态发酵原料；将第二步得到的发酵醪液按固态发酵原料重量的50~100%的比例与发酵原料混合，进行有氧固态发酵，发酵条件为：起始温度20~30℃，过程控制温度30℃~45℃，发酵时间为48~72h；

  第四步，烘干包装

  发酵结束，将发酵物料在60~70℃条件下烘干到含水量≤12%，粉碎后计量包装，即可得到富含四种必需氨基酸的高蛋白饲料。

2.根据权利要求1所述的富含四种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中谷氨酸棒杆菌与近平滑假丝酵母混菌发酵液的制备方法为：

将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的任意四种谷氨酸棒杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵种子培养基中培养，培养基组成：葡萄糖100~120g/L、(NH₄)₂SO₄ 20~30g/L、玉米浆10~20g/L、KH₂PO₄ 1~1.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.3~0.5 g/L、生物素5~8×10^-5 g/L、CaCO₃ 10~30 g/L；pH7.0，0.12 MPa下灭菌20 min；培养条件：罐压0.03~0.1 Mpa，搅拌转速 170~230 r/min，通风量1:0.25~0.5，培养温度30~32℃，发酵时间24~48h；将近平滑假丝酵母用无菌生理盐水制成悬浮菌液，当谷氨酸棒杆菌发酵液的产酸率达到5.0%以上时，接入近平滑假丝酵母悬浮菌液，继续培养发酵10h即可。

3.根据权利要求1所述的富含四种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中植物乳杆菌发酵液的制备方法为：

使用固体MRS培养植物乳杆菌，将植物乳杆菌一级固体种子用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：葡萄糖或糖蜜20-50g/L、玉米浆20~35 g/L，七水合硫酸镁0.25~0.35 g/L，四水合硫酸锰0.01~0.015 g/L，七水合硫酸铁0.01~0.015 g/L，乙酸钠16~21 g/L，Tween-80 l mL/L；培养条件：罐压0.03~0.1 Mpa静置培养，培养温度30~32℃，发酵时间18~22 h。

4.根据权利要求1所述的富含四种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法，其特征在于：所述第一步中纳豆芽孢杆菌发酵液的制备方法为：

将使用牛肉膏蛋白胨培养基活化后的纳豆芽孢杆菌种用无菌生理盐水制成悬浮菌液，接种到液体发酵培养基中，培养基组成：豆粕粉1.0~3.0%，玉米粉1.0~3.0%，硫酸镁0.2~0.6%，硫酸锰0.02~0.06%，氯化钠0.5~1.0%；培养条件：罐压0.05~0.1 Mpa，搅拌转速170~230 r/min，通风量1:0. 5~1.2，培养温度32~35℃，发酵时间18~24 h。