[发明专利]一种快速增加细胞膜通透性的细胞内液及其方法有效
| 申请号： | 201510280313.1 | 申请日： | 2015-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN104911241B | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 李志远;高超;刘静馨 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞膜通透性 细胞内液 两性霉素B 膜片钳实验 常规细胞 伊维菌素 质量分数 体积比 封接 高阻 内液 破膜 溶解 | ||
1.一种快速增加细胞膜通透性的细胞内液，其特征在于，其是先将两性霉素B溶解于DMSO中，配制成10mg/mL两性霉素B的DMSO溶液，然后将两性霉素B的DMSO溶液、质量分数0.3％的Triton X-100溶液和常规细胞内液按照体积比50：10：1000的比例混合均匀，由此得到快速增加细胞膜通透性的细胞内液。
2.根据权利要求1所述的细胞内液，其特征在于，所述的快速增加细胞膜通透性的细胞内液是通过以下方法制备：
将每0.01g的两性霉素B溶解于1mL DMSO，置于涡旋振荡器上以3200rpm转速震荡2min，混匀后放置在超声仪中以40KHz的频率超声10min，最终配制成10mg/mL两性霉素B的DMSO溶液，再按每吸取50μL两性霉素B的DMSO溶液、10μL质量分数0.3％的的Triton X-100溶液溶于1mL的常规细胞内液中，置于涡旋振荡器上震荡1min，然后以40KHz的频率超声10min，最后在以500rpm的转速离心30s发现无悬浮颗粒沉降，由此得到快速增加细胞膜通透性的细胞内液。
3.根据权利要求1所述的细胞内液，其特征在于，所述的常规细胞内液为含有130mMCsMeth,24mM CsCl,10mM HEPES,1mM CaCl2,1mM MgCl2，溶剂为水。
4.一种快速增加细胞膜通透性从而快速破膜形成高阻封接的方法，其特征在于，将含伊维菌素的细胞外液灌入快速加药管中，再将权利要求1所述的快速增加细胞膜通透性的细胞内液灌入微电极中，然后利用含快速增加细胞膜通透性的细胞内液的微电极钳制细胞达到高阻封接后，提起贴壁细胞至快速加药管口，打开快速加药管，使细胞在含伊维菌素的细胞外液中孵育，使细胞在电生理测试状态下Ra值降至10MΩ左右，再停止孵育。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的含伊维菌素的细胞外液，其制备方法是将伊维菌素溶于常规细胞外液中，使伊维菌素的浓度为2μM，由此得到含伊维菌素的细胞外液。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的常规细胞外液含有154mM NaCl，10mM D-glucose，10mM HEPES，1mM CaCl2，溶剂为水。
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