[发明专利]一种红毛走马胎药材或其提取物的检测方法

权利要求书

1.一种使用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定红毛走马胎药材或其提取物中百两金皂苷B含量的检测方法，其步骤包括：色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、百两金皂苷B含量测定；其中百两金皂苷B含量测定的方法为：分别精密吸取百两金皂苷B对照品溶液5μL、20μL；红毛走马胎供试品溶液5～10μL；注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件与系统适用性试验是用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为60∶40～70∶30的甲醇-水为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按百两金皂苷B计算不得低于5000。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备采用如下方法：取百两金皂苷B对照品适量，精密称定，加40～80％甲醇或乙醇制成每1ml含0.05～0.15mg的百两金皂苷B对照品溶液，即得。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述百两金皂苷B对照品采用如下方法自制：将红毛走马胎粉碎，用50％～80％乙醇提取，将提取液减压浓缩，上大孔吸附树脂，用水和30％乙醇冲洗除杂，再用80％乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，上硅胶柱层析，以体积比为70∶30的乙酸乙酯-甲醇洗脱，合并富含百两金皂苷B的流份，除去溶剂，甲醇重结晶，用制备型高效液相色谱分离纯化，色谱条件：C₁₈柱；流动相：体积比为60∶40～70∶30的甲醇-水；检测波长：205nm，收集目标峰流出液，浓缩、干燥，即得。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备采用以下方法：取红毛走马胎药材粉末(过三号筛)0.1～0.2g，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入50～70％的乙醇或甲醇25～100mL，密塞，称定重量，超声处理50min以上，取出，放冷，再称定重量，用相同溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤或离心，取续滤液或上清液，即得。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述超声处理指超声功率200～400W，频率30～50kHz。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述采用HPLC-ELSD法测定百两金皂苷B含量包括如下步骤及优化条件：

照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为65∶35的甲醇-水为流动相；蒸发光散射检测器检测，理论板数按百两金皂苷B计算不得低于5000；

对照品溶液制备取百两金皂苷B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含0.1mg的百两金皂苷B对照品溶液，即得；

供试品溶液制备取红毛走马胎药材粉末(过三号筛)0.15g，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入50％乙醇50mL，密塞，称定重量，超声(功率300W，频率40kHz)处理60分钟，放冷，再称定重量，用50％乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得；

测定方法分别精密吸取对照品溶液5μL、20μL；供试品溶液5～10μL；注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。