[发明专利]转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测的引物和探针及方法

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及基因的定量分析方法，具体是指转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测方法。本发明采用设计的特异性上游引物序列Event MON88017‑Forward、下游引物序列Event MON88017‑Reverse、荧光探针序列Event MON88017‑Probe、MON88017品系的DNA稀释液以及Taqman Master mix（2×）和水配制成PCR反应体系，进行定量PCR检测。本发明主要建立了一种高扩增效率、高准确度的Taqman定量PCR检测技术，适用于国内农业转基因生物及产品监督检验、进出境口岸转基因生物及产品检验、企业内部进口原材料含转基因MON88017品系生物成分检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及基因的定量的分析方法。

背景技术

国际上很多国家对转基因产品实施限量标识和进口，而我国尚无具体的转基因产品标识阈值。为了打破欧盟等国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒，同时弥补和完善我国转基因生物及产品定量检测技术体系，更好地保护消费者对转基因产品的知情权和选择权，建立一种新型转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测方法已成为必要。

目前关于转基因玉米MON88017的检测技术，主要集中在普通定性PCR分析方法，尚无关于扩增检测转基因玉米MON88017及产品的品系特异性某特定位点(基因序列)的高灵敏度定量PCR精准检测技术。

发明内容

本发明的目的主要是提供一种扩增效率高、准确度高和灵敏度高的检测转基因玉米MON88017及产品的品系特异性某特定位点的定量PCR精准检测技术。

本发明通过下述技术方案实现：

转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测的引物和探针，

其中，

上游引物序列：Event MON88017-Forward：5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3'；

下游引物序列：Event MON88017-Reverse：5'-CCGGACATGAAGCCATTTACA-3'；

荧光探针序列：

Event MON88017-Probe：5'-FAM-CTTTTTTGCCGGAGTATGACGGTGACG-3'。

转基因玉米MON88017品系特异定量PCR精准检测方法，包括以下步骤：

(1)合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列：Event MON88017-Forward：5'-CGCTAGCAGCTCTCCTCCAA-3'；

下游引物序列：Event MON88017-Reverse：5'-CCGGACATGAAGCCATTTACA-3'；

荧光探针序列：

Event MON88017-Probe：5'-FAM-CTTTTTTGCCGGAGTATGACGGTGACG-3'；

(2)制备MON88017品系的DNA稀释液；

(3)配制PCR反应体系；

(4)定量PCR检测。

进一步地，步骤(1)所述合成的引物及荧光探针的浓度均为10μmol/l，步骤(2)所述制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。

再进一步地，步骤(3)所述的配制PCR反应体系，即将3μl的DNA稀释液加入到反应体系中，所得的反应体系包括以下组分：