[发明专利]一种高产松茸诱变菌株及培育方法

说明书

本发明公开一种松茸菌诱变菌株及培育方法，通过化学诱变筛选分离得到一株高产松茸新菌株，其保藏号为CCTCC N0:2014671，其菌丝体干重较原出发菌提高了69.68%，腺苷含量提高了33.96%，多糖含量提高了75.72%，蛋白含量提高了35.17%，甘露醇含量提高52.8%。本发明的松茸新菌株经10次以上传代培养不退化，具有遗传稳定性。本发明还公开了松茸诱变菌株的最适发酵培养基。

技术领域

本发明涉及到一种高产松茸诱变菌株，为一种新的菌株品种，本发明还提供了该菌株的培育方法，属于生物发酵工程技术领域。

背景技术

松茸（Tricholoma matsutake Sing.）属担子菌、担子菌纲、伞菌目、口蘑科、口蘑属，又名杉蕈、松菇、合菌、台菌、松菌。松茸使用历史悠久，全球分布广泛，肉白嫩肥厚，质地细密，有浓郁的特殊香气，其营养丰富，含有蛋白质、氨基酸、多种维生素、碳水化合物和矿物质等有效成分，是名贵的野生菌类。松茸的主要生物活性物质是多糖、多肽和甾醇等，药理作用方面研究表明松茸具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗辐射和治疗糖尿病等功能，具有良好的药用前景和开发价值。

目前松茸主要来源于野生采摘，人工栽培十分困难，大量的市场需求造成松茸资源枯竭、生态环境遭到破坏同时导致价格高昂，这就给松茸产业发展带来很大的障碍。采用现代生物工程技术，通过发酵菌株的人工改良和发酵工艺过程的优化两种途径， 快速、有效的获得松茸有效产物以打破目前发展屏障，为松茸产业开发奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种松茸诱变菌株，为一种新的菌株，其菌丝体干重、多糖、腺苷、甘露醇含量和野生菌相比有显著提高。

本发明还提供了该菌株的培育方法，适用于工业化生产。

本发明所提供的松茸诱变菌株：在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址：武汉大学，保藏日期：2014年12月25日，分类名称：松茸T35 Tricholoma matsutake T35；保藏登记号为CCTCC NO：M 2014671。

本发明所述的松茸菌株培育方法，包括以下步骤：

（1）将保藏号为CGMCC 5.793松茸菌株，活化后接种于PDA斜面，在23-27oC恒温箱中培养4-8天，向斜面培养基中注入pH6.0磷酸缓冲液，然后用4层纱布过滤，稀释孢子浓度至106-107个/mL，用于诱变育种；

（2）称取10mg亚硝基胍于直径7cm的培养皿中，加助溶剂丙酮少许后，加入无菌磷酸缓冲液9mL (pH=6.0)，开启磁力搅拌器慢慢搅拌，待NTG充分溶解后吸取1mL菌悬液放入平皿开始诱变(亚硝基胍终浓度为lmg/mL)。分别诱变2min、5min、10min、15min和20min之后，取0.3mL菌悬液于2.7mL无菌蒸馏水并逐级稀释；

（3）对诱变后的孢子悬液，进行梯度稀释，PDA培养基平板培养3-7天后，将长出的单菌落用灭过菌的牙签点对点植入装有PDA固体培养基的96孔板中培养。将培养好的突变株用接种针逐个接种于250mL锥形瓶中进行培养，26oC 150rpm培养4-6天获得松茸菌丝体，测定菌丝体干重、多糖、甘露醇以及腺苷含量，筛选高产的松茸菌株；

（4）获得的高产松茸诱变菌株经过连续传代，培养条件为26oC，150rpm恒温摇床中培养90-120h，测定菌丝体干重、多糖、甘露醇以及腺苷含量，考察诱变菌株的遗传稳定性，从而最终确定目的菌株。

该松茸诱变菌株T35菌丝生长快速，菌丝体为白色，可进行快速液体深层培养，该菌株的液体深层发酵特征如下：

（1）一级斜面菌种