[发明专利]一种检测黄曲霉毒素M1的化学发光免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测黄曲霉毒素M1的化学发光免疫试剂盒，用于检测黄曲霉毒素M1的含量，属于免疫学检测领域。

背景技术

黄曲霉毒素M1(AflatoxinM1，缩写AFM₁)属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，该类毒素是由常见的黄曲霉菌(AsperillusFlavus)和寄生曲霉菌(AsperillusParasiticus)产生的代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。

黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物，而且是曲霉菌等菌类的高毒代物。大多数政府机构都对人体和动物可摄入的黄曲霉毒素量有严格的法规限制。很多国家已经对牛奶和乳制品中的黄曲霉毒素M1含量有了明确的限量标准。黄曲霉毒素1993年被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为I类致癌物。

AFM₁是黄曲霉毒素B1的代谢物，其基本结构为一个二呋喃环的氧杂萘邻酮，溶于多种有机溶剂，如氯仿、乙腈、甲醇和水，但不溶于正已烷、石油醚、乙醚等非极性溶剂中，物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒破坏。其中黄曲霉毒素B1是最主要的一种毒素，哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，在体内的肝微粒体单氧化酶系催化下，通过细胞色素P-448调节作用，AFB₁末端呋喃环C-10被羟化而生成AFM₁，一部分从尿和乳汁排出，另一部分存在于动物的可食部分中；AFM₁也可由一些黄曲霉菌和寄生曲霉直接产生。黄曲霉毒素M1主要存在于土壤、动植物、霉变谷物、各种坚果、食品、调味品、食用油、牛奶和奶制品等霉变制品中，直接或间接进入人类食物链，是致癌致畸致突变的毒物，严重威胁人类健康和生命安全。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素污染的食品之一。为保证其安全卫生，各国都制定了严格的限量标准。美国FDA规定牛乳中黄曲霉毒素M1的限量水平为0.5μg/kg，我国规定牛乳中黄曲霉毒素M1含量不得超过0.5μg/kg。

目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有：免疫亲和层析净化高效液相色谱法、免疫亲和层析净化荧光光度法、薄层色谱等多种检测方法。免疫亲和层析净化高效液相色谱法，样品前处理过程较为复杂、耗时、需纯化处理，检测需要昂贵的实验室大型试验仪器和设备，配备专业检测人员进行试验操作，难以满足现场大规模检测。免疫亲和层析净化荧光光度法，样品前处理过程较为复杂、耗时、需纯化处理，检测需要荧光光度计，难以满足现场检测需要。薄层色谱法样品前处理繁琐，实验过程复杂、耗时、准确性差，灵敏度低、特异性不强，且对实验操作人员危害较大。本发明建立的化学发光免疫法具有高通量、灵敏度高、特异性强、检测成本低、准确快速等优点，能够满足现场大规模检测的快速筛选检验的要求。

发明内容

本发明的目的在于，针对现有技术不足，提供一种检测乳制品的化学发光免疫试剂盒，具有高通量、灵敏度高、特异性强、检测成本低、准确快速等优点，能够满足现场大规模检测的快速筛选检验的要求。

本发明主要利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现。化学发光免疫分析方法是化学发光法和免疫分析法结合的产物，故其同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中黄曲霉毒素M1含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中黄曲霉毒素M1含量越少，发光强度越高。

本发明一种检测黄曲霉毒素M1的化学发光免疫试剂盒，包含以下成份：

包被有抗黄曲霉毒素M1抗体的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化学发光板。

所述的黄曲霉毒素M1标准品溶液6瓶，浓度分别为0ug/L、0.05ug/L、0.1ug/L、0.2ug/L、0.4ug/L、0.6ug/L。

酶标抗原浓缩液：是由黄曲霉毒素M1与牛血清蛋白偶合制成的人工抗原与辣根过氧化物酶偶联制备得到。

酶标抗原稀释液：0.01-0.02M磷酸盐缓冲液，pH7.0-8.0,0.5-1%的牛血清蛋白。

发光底物液。发光底物液分为A、B液。A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，B液为过氧化氢脲溶液。

浓缩复溶液。浓缩复溶液具体为2倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于样品前处理。

浓缩洗涤液。浓缩洗涤溶液具体为含有吐温-20（Tween-20）缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。

本发明溶液的配制：