[发明专利]一种能特异性检测轮状病毒的核酸适体及试剂盒

说明书

本发明公开了一种能特异性检测轮状病毒的核酸适体及试剂盒。本发明提供的核酸适体SEQ ID No1‑2，与轮状病毒VP4蛋白具有较好的亲和能力。利用本发明的核酸适体，可以捕获溶液中的轮状病毒，也可以检测溶液中轮状病毒的VP4蛋白，将其制备成为相应的试剂盒，将有利于轮状病毒血清学诊断和血液筛查。利用本发明的核酸适体进行轮状病毒检测，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及一种能特异性检测轮状病毒的核酸适体及试剂盒。

背景技术

轮状病毒是全球婴幼儿严重腹泻病最常见的病原体之一，其主要感染小肠上皮细胞，从而造成细胞损伤，引起腹泻。轮状病毒每年在夏秋冬季流行，感染途径为粪一口途径，临床表现为急性胃肠炎，呈渗透性腹泻病，病程一般为7天，发热持续3天，呕吐2～3天，腹泻5天，严重出现脱水症状。

轮状病毒总共有七种，分别以英文字母编号为A、B、C、D、E、F与G等。人类主要是受到轮状病毒A种、B种与C种的感染，而其中最常见的是轮状病毒A种的感染。而这七种轮状病毒都会在其他动物身上造成疾病。

在轮状病毒A种之中有不同的病毒株，称之为血清变异株(serovar)。与流行性感冒病毒类似，轮状病毒使用了双重的分类系统，依据病毒体表面的两个结构性蛋白质来作分类的。糖蛋白VP7定义了G型。而对于蛋白酶敏感的蛋白质VP4则定义了P型。P型会以一个数字来标示出P血清型，并用方括弧内部的一个数字来标示所对应的P基因型。G血清型的表示方法也很类似，但是G基因型的数字会与G血清型的数字相同。举个例来说，“轮状病毒Wa病毒株”(rotavlrus straln Wa)就会被标示成“P1A[8]G1”。因为这两个决定G型跟P型的基因可以被分开传送而产生后代，所以两基因不同的组合就会产生各种不同的病毒株。

轮状病毒在世界各地均有分布，A、B、C组轮状病毒能引起人类和动物腹泻，D-G组只引起动物腹泻。A组主要流行的血清型为G1P8、G2P4、G3P8和G4P8，在所有就诊病例中占到80％以上。年长儿童和成人常呈无症状感染，通常称病毒携带者。无论在发达或发展中国家，A组RV引起的腹泻都有较高的发病率，是婴幼儿发病和致死的重要病因。在发展中国家，为婴幼儿致死的仅次于呼吸道感染的第二位病因。粪-口是RV传播的主要途径，此外水源污染，呼吸道空气传播，院内和幼托所及家庭成员中的密切接触均可造成流行，还有人推测，动物可能是作为人感染RV的重要传染源。病毒侵入人体后在小肠粘膜绒毛细胞内增殖，病毒外壳蛋白VP4为主要致病因子，它造成细胞溶解死亡，微绒毛萎缩、变短、脱落；腺窝细胞增生、分泌增多，导致严重腹泻，水和电解质的丧失。病毒的潜伏期只有一到两天，然后突然发烧、水样腹泻、呕吐脱水，凭自身免疫可完全恢复。但当婴儿营养不良或已有脱水，若不及时治疗，就会导致婴儿死亡。由于病毒本身变异较大，针对性疫苗难以实现产业化，世界卫生组织(WHO)推荐以预防为主，注意婴幼儿营养和卫生状况来达到降低病毒的感染率。

传统检测RV感染的方法主要依赖于电镜(EM)或免疫学测定，如酶联免疫吸附(EL1SA)等等。近年随着分子遗传学等的发展，建立了更为特异和敏感的检测方法，如RNA核酸杂交，RT-PCR等用于检测核酸的方法。

核酸适体(Aptamer，又称适配体，适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物靶标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systematlc Evolutlon of Llgands by Exponentlal enrlchment，SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。