[发明专利]一种百两金皂苷B对照品的制备方法

说明书

本发明以制备型高效液相色谱为分离手段，以一定比例的含甲醇或乙醇或乙腈的水溶液为洗脱体系，目标峰洗脱液直接减压浓缩干燥即可获得纯度大于98％的百两金皂苷B化学对照品。其制备过程包括如下步骤：(1)百两金药材的提取；(2)大孔吸附树脂柱分离；(3)制备型高效液相色谱分离纯化，最终得到百两金皂苷B化学对照品；该对照品采用薄层色谱多个展开系统及显色方法检查均为一个色谱斑点，进一步采用高效液相色谱‑蒸发光散射检测法(HPLC‑ELSD)检查，其目标峰用峰面积归一化法计算，质量浓度大于98％；变换不同色谱柱及多个流动相系统，测定结果均一致。说明制备的百两金皂苷B符合中药定量分析用化学对照品的要求。本制备方法纯度高、色泽好、成品收率较高，可以规模化生产。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及药品的质量控制方法，具体是指百两金皂苷B原料或其制剂的分析检测方法。

背景技术

百两金(Ardisia crispa(Thunb.)DC.A.)是紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属(Ardisia Sw.)常绿灌木植物，以全株入药，具有清咽利喉、散淤消肿、舒筋活血、祛痰止咳和提脓生肌的功效，、我国民间多用于治疗咽喉痛、扁桃体炎、肾炎水肿、跌打损伤、风湿疼痛、白浊、骨结核、劳伤咳血、痈疔和毒蛇咬伤等。现代药理研究表明，本药材具有细胞毒活性和抗肿瘤作用，同时具有抗炎、抑菌、收缩子宫、抗氧化等活性作用。百两金皂苷B(ardisiacrispin B)是该药材主要活性成分之一，其化学结构式如下：

目前对百两金等同属植物的研究热点主要集中在化学成分、药理作用和临床应用等方面，也有人建立了百两金药材中岩白菜素和百两金皂苷A含量测定的方法(侯金玲等.HPLC-ESLD测定瑶药竹叶风中岩白菜素和百两金皂苷A含量的方法研究[J]广西医科大学学报2014，31(1)：50-54)，但由于缺乏对照品，一直未见百两金皂苷B的定量分析方法。

百两金皂苷B的化学名称为西克拉敏A 3-O-α-鼠李吡喃糖-(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖-(1→4)-[β-D-葡萄吡喃糖-(1→2)-]-α-L-阿拉伯吡喃糖苷，是存在于紫金牛科紫金牛属植物百两金、朱砂根、红毛走马胎等多种植物中的有效成分，在深入研究开发该活性成分的过程中，需要将其提取制备成含量大于90％的中药1类新药原料，并进而制备成制剂。这就需要首先分离得到百两金皂苷B单体，并按照对照品研究技术指导原则进行纯化及结构鉴定。本发明采用制备高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-ELSD)建立起百两金皂苷B化学对照品的制备方法，为进一步的深入研究和新药开发提供新的参考。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种百两金皂苷B化学对照品的制备方法。

本案发明人通过对百两金皂苷B化学成分进行文献查阅和实验研究，发明了百两金药材回流提取、大孔吸附树脂分离纯化，高效液相色谱制备百两金皂苷B的方法，经薄层色谱多个展开及显色系统分离均显示一个斑点，采用HPLC-ELSD峰面积归一化法计算，其质量浓度大于98％，符合中药定量分析用化学对照品纯度的质量要求，因而完成了本发明。

本发明的技术方案是以制备型高效液相色谱为分离手段，以一定比例的含乙醇或乙腈水溶液为洗脱体系，获得纯度大于98％的百两金皂苷B化学对照品；具体步骤为：

1)取百两金药材，粉碎成颗粒，加60％～80％的乙醇回流提取，滤过，减压回收醇得提取液；

2)将提取液上大孔吸附树脂柱，水洗至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用用浓度低于20％的乙醇洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液；用80％乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减压浓缩干燥得浸膏粉；