[发明专利]一种体外肝灌流装置及其用途

权利要求书

1.一种体外肝灌流装置，其特征在于：包括灌流液储存容器组、四通管、灌流泵、热交换系统、氧合器、去泡器、灌流导管、三通管和回流泵；

所述灌流液储存容器组包括容器A、容器B和容器C，所述容器A、容器B、容器C均设有进液口和带有截止阀的出液口，所述容器C还设有回流口；

所述灌流泵、热交换器、氧合器、去泡器、灌流导管和回流泵均设有进液口和出液口；

所述四通管的四个管口分别与容器A的出液口、容器B的出液口、容器C的出液口和灌流泵的进液口通过软管相连；灌流泵的出液口与热交换系统的进液口、热交换系统的出液口与氧合器的进液口、氧合器的出液口与去泡器的进液口、去泡器的进液口与灌流导管的进液口、回流泵的出液口与容器C的回流口均通过软管相连；

所述灌流导管的出液口伸入装肝脏容器中，所述装肝脏容器的底部还设有出液口；

所述三通管位于装肝脏容器的下方，三通管的其中两个管口分别通过软管连接装肝脏容器的出液口、回流泵的进液口，三通管的第三个管口连接废液管，所述废液管上设有截止阀。

2.根据权利要求1所述的体外肝灌流装置，其特征在于：

所述容器A的进液口、容器B的进液口和容器C的进液口均为带液体灭菌滤膜的进液漏斗，分别位于相应容器的顶部；

所述容器A的出液口、容器B的出液口和容器C的出液口均位于底部；

所述容器A、容器B和容器C的顶部均设有带空气滤膜的透气孔；

所述容器A、容器B和容器C均设有液位计。

3.根据权利要求1所述的体外肝灌流装置，其特征在于：所述热交换系统由热交换器、热循环泵和恒温水浴锅组成。

4.根据权利要求1所述的体外肝灌流装置，其特征在于：所述容器A的容积为4-10L，容器B的容积为1-2L，容器C的容积为2-4L。

5.根据权利要求1所述的体外肝灌流装置，其特征在于：所述装肝脏容器带有帽盖。

6.根据权利要求1-5任一项所述的体外肝灌流装置，其特征在于：所述软管的内径为6mm-10mm。

7.一种使用权利要求1-6任一项所述体外肝灌流装置进行原代肝细胞分离制备的方法，其特征在于：

(1)将灌流液Ⅰ装入容器A中，灌流液Ⅱ装入容器B中，灌流液Ⅲ装入容器C中；

(2)用灌流液Ⅰ预灌注软管至去泡器出口，使容器A和去泡器出口之间充满灌流液Ⅰ；

(3)取离体的动物肝脏置于装肝脏容器中，先用灌流液Ⅰ灌流，灌流速度为300-1000mL/min，灌流时间为10-12分钟；再用灌流液Ⅱ灌流，灌流速度为300-1000mL/min，灌流时间为2-3分钟；最后用灌流液Ⅲ灌流，灌流速度为300-1200mL/min，灌流时间为25-40分钟；

其中，所述灌流液I每升含有如下成分：8.1-8.5克氯化钠，0.5克氯化钾，2.2-2.6克HEPES，3.5-4.5克NAC,0.9-1.1克EGTA,其余为去离子水；

所述灌流液II每升含有如下成分：8.1-8.5克氯化钠，0.5克氯化钾，2.2-2.6克HEPES，其余为去离子水；

所述灌流液III每升含有如下成分：3.8-4克氯化钠，0.5克氯化钾，23-25克HEPES，0.07克二水氯化钙，3.5-4.5克白蛋白，162-260Wünsch单位胶原酶，其余为去离子水；

(4)分离肝细胞：洗涤步骤(3)处理后的肝脏，收集肝细胞悬液，过滤、离心，收集沉淀即可。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，

所述灌流液I每升含有如下成分：8.3克氯化钠，0.5克氯化钾，2.4克HEPES，3.5-4.5克NAC,0.9-1.1克EGTA,其余为去离子水；

灌流液II每升含有如下成分：8.3克氯化钠，0.5克氯化钾，2.4克HEPES，其余为去离子水；

灌流液III每升含有如下成分：3.9克氯化钠，0.5克氯化钾，24克HEPES，0.07克二水氯化钙，4克白蛋白，162-260Wünsch单位胶原酶，其余为去离子水。