[发明专利]一种高产绣球菌诱变菌株及培育方法

说明书

技术领域

本发明公开一种高产绣球菌诱变菌株，为一种新的菌株品种，本发明还提供了该菌株的培育方法，属于微生物技术领域。

背景技术

绣球菌Sparassis crispa是非褶孔菌目、绣球菌科、绣球菌属。其发酵培养得到的菌丝体产物可抗肿瘤、提高免疫力、恢复疲劳、祛斑美白，治疗糖尿病、高血压、脑血栓等疾病，均取得显著疗效。

在本发明中，选育了一株绣球菌优良高产菌株，其发酵产物菌丝体产量较野生型绣球菌有显著提高，对其深入研究和广泛应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高产绣球菌诱变菌株，为一种新的菌株，其发酵产物菌丝体产量较原始野生菌相比有显著提高。

本发明还提供了该菌株的培育方法，适用于工业化生产。

本发明的绣球菌诱变菌株：在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址：武汉武汉大学，保藏日期：2015年5月3日，分类名称：绣球菌SC031;Sparassis crispa SC031，保藏登记号为CCTCC NO:M 2015275。

本发明所述的高产绣球菌菌株培育方法，包括以下步骤：

1）将绣球菌原始菌株Sparassis crispa cfcc 6296，接种于PDA斜面，24-26℃恒温箱中培养5-7 天，向斜面试管中注入无菌生理盐水，振荡后用无菌脱脂棉过滤，稀释成浓度为1×10⁶个/mL的孢子悬液；

2）取孢子悬液2 mL，加入1 mL 0.2M NaNO₂溶液和1 mL pH4.4 醋酸缓冲液，室温震荡并计时，诱变30 min，取0.1 mL悬液加入到5 mL 0.2M pH8.0 磷酸缓冲液中，终止诱变，取诱变后孢子悬液于无菌生理盐水中逐级稀释，PDA培养基平板培养5-7天后，将菌株于48孔板保存；

3）用灭菌的牙签将48孔板中菌株挑到PDA培养基的平板上，用平板筛选生长迅速的菌株；

4）筛选生长较迅速的菌落，将其挑到盛有PDA培养基的摇瓶中复苏6 d；将菌株传代培养，在盛有100 mL PDA培养基的250 mL锥形瓶中，接种绣球菌诱变菌株菌悬液3 mL，26℃恒温摇床中培养6 d；

5）将诱变得到的突变菌株保存于试管斜面培养基中，离心菌丝体，5000 rpm，离心10 min，水洗一次，菌丝体铺于平板冻干，冻干粉末称重，粉碎，过60目筛，测定其胞内多糖含量，筛选高产的绣球菌菌株；

本发明所述的绣球菌高产菌株的培养基，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的：蔗糖20 g/L、酵母浸粉20 g/L、MgSO₄·7H₂O 3 g/L、KH₂PO₄ 3 g/L。

本发明所述的高产绣球菌诱变株的特征为：

绣球菌诱变菌株菌丝体干重和胞内多糖含量与原始菌株相比均有显著提高，其中菌丝体干重可达11122 g/L，较原始菌株提高了3434%；胞内多糖含量可达123g/L，较原始菌株提高了123123%；经过10次以上的连续传代培养不退化，具有遗传稳定性。

本发明的积极效果在于：诱变的绣球菌新菌株经10次以上传代培养不退化，具有遗传稳定性，并且发酵产物菌丝体产量和胞内多糖含量远远高于原始菌株。

具体实施方法

为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

实施例1：

绣球菌突变株的诱变和选育方法

（1）绣球菌诱变