[发明专利]一种产生物表面活性剂的混合菌及其筛选方法

权利要求书

1.一种产生物表面活性剂的混合菌，其特征在于：由三种菌株混合组成，该三种菌株分别为，

(1)名称为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)，保藏编号为CCTCC AB 205091；

(2)名称为类诺卡氏菌属(Nocardioides ginsengagri)，保藏编号为CCTCC S2013441；

(3)名称为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，保藏编号为CCTCC AB 205141。

2.根据权利要求1所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：包括下述步骤：

(1)待筛选采油菌株的挑选，其中所述待筛选采油菌株包括保藏编号为CCTCC AB205091且名称为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、保藏编号为CCTCC S2013441且名称为类诺卡氏菌属(Nocardioides ginsengagri)和保藏编号为CCTCC AB 205141且 名称为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的菌株；

(2)将(1)中挑选好的待筛选采油菌株进行活化及培养；

(3)将经(2)中活化及培养好的待筛选采油菌株利用血平板法进行初步筛选，得到初筛发酵液；

(4)将(3)中所得初筛发酵液采用排油圈法进行复筛，得到产生物表面活性剂的混合菌。

3.根据权利要求2所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：步骤(2)中待筛选采油菌株的活化过程为：将待筛选采油菌株转接于斜面培养基上，37℃下培养2d，其中斜面培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH7.0，121℃蒸汽灭菌20min。

4.根据权利要求2所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：步骤(2)中待筛选采油菌株的培养过程依次包括种子培养和发酵培养。

5.根据权利要求4所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：所述种子培养的过程为：取经斜面培养基培养活化后的带筛选菌株的种子一环，转接于种子液体培养基中，37℃摇床培养16h，转速为160r/min，其中种子液体培养基为：葡萄5g，牛肉3g，蛋白胨10g，MgSO₄·7H₂O为2g，去离子水1000mL，pH7.2，121℃蒸汽灭菌20min。

6.根据权利要求4所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：所述发酵培养的过程为：以4％的接种量将种子培养所得种子液接种于初始发酵培养基中，37℃摇床培养72h，转速为160r/min，其中初始发酵培养基为：葡萄糖20g，蛋白胨4g，KH₂PO₄为5g，K₂HPO₄为5g，MgSO₄·7H₂O为0.25g，NaCl为2g，CaCl₂为0.08g，去离子水1000mL，pH7.0，121℃蒸汽灭菌20min。

7.根据权利要求2所述的产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，其特征在于：步骤(3)中血平板法的步骤为：用无菌牙签将经发酵培养好的待筛选菌株点种在冷却的血平板分离培养基上，37℃培养24h～48h，根据血平板上溶血圈直径来初步判断菌株产生物表面活性剂的能力，其中血平板分离培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂15g～20g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.2，121℃蒸汽灭菌20min，在培养基冷却至45℃左右时，加入100mL新鲜猪血上清液，混匀。