[发明专利]利用质谱进行叶酸遗传代谢能力检测

权利要求书

1.一种用于检测叶酸遗传代谢能力相关的SNP的引物组合物，其序列为：

。

2.权利要求1的引物组合物，其中PCR引物序列为核心序列，其在5'端可包括保护5-15个碱基序列，优选为10bp的tag：ACGTTGGATG。

3.权利要求1的引物组合物，其中延伸引物5'端可增加作为接头的碱基序列，其中优选为1-15个碱基，更优选1-3个碱基。

4.由权利要求1至3的引物组合物所制备的用于检测叶酸遗传代谢能力相关基因多态位点的检测产品。

5.权利要求4的检测产品，其中产品为检测试剂盒，包括：

(1)用于PCR的反应试剂，包括：特异性PCR引物，耐高温的DNA聚合酶，dNTPs，PCR反应缓冲液；

(2)用于PCR产物纯化的试剂；

(3)用于单碱基延伸反应的试剂，包括：延伸引物，耐高温的单碱基延伸酶，ddNTPs，延伸反应缓冲液。

6.权利要求5的检测产品，其中试剂盒还可包括：阴性质控品，阳性质控品，纯化用树脂，点样及质谱检测用靶片，外切酶，干血片DNA提取试剂等试剂。

7.权利要求5的检测产品，其中用于PCR产物纯化的试剂选自碱性磷酸酶，或碱性磷酸酶和外切酶ExoI，或电泳凝胶回收试剂，或PCR产物纯化柱。

8.权利要求7的产品，其中当包括碱性磷酸酶和外切酶ExoI的纯化试剂时，所使用的PCR引物无需包括保护碱基。

9.使用权利要求1-3的引物组合物，或权利要求4-8的产品来检测叶酸遗传代谢能力相关基因多态位点的方法，包括：

(1)多重PCR：使用特异性的PCR引物，在一个反应体系中，对3处与叶酸遗传代谢能力相关的基因多态位点所在DNA区域同时进行扩增，得到含3处基因多态位点所在DNA区域的PCR产物；

(2)PCR产物纯化：对步骤(1)得到的PCR产物进行纯化，以减少对后续反应的干扰；

(3)单碱基延伸：使用3条特异性的延伸引物，在一个反应体系中，对步 骤(2)得到的纯化后PCR产物进行多重单碱基延伸，延伸引物在对应的SNP位点处延伸一个核苷酸，该核苷酸与SNP位点处的基因型互补配对；

(4)延伸产物纯化：对步骤(3)得到的延伸产物进行纯化，以获得高纯的延伸产物，避免盐离子等杂质对后续检测的影响；

(5)质谱仪检测：将步骤(4)得到的纯化产物点在含有基质的靶片上，放入质谱仪进行进行检测；

其中，所述3个与叶酸遗传代谢能力相关的SNP分别是：MTHFR基因rs1801133位点(C677T)，MTHFR基因rs1801131位点(A1298C)，和MTRR基因rs1801394位点(A66G)。

10.权利要求4-9所述的试剂盒在检测3个叶酸遗传代谢能力相关的SNP的用途。