[发明专利]人参特异性RAPD标记的DNA片段、鉴别人参的SCAR标记特异性引物对及方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及中药及中药材鉴定领域，具体涉及到一种利用SCAR技术鉴定人参的特异性引物对及方法。

背景技术

人参为五加科Araliaceae人参属Panax植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎，多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。主产于我国东北三省和朝鲜，被誉为“百药之王”；具有大补元气、强心固脱、补脾益肺、安神生津的功效；用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴等证；五加科人参属主要药用植物为：人参Panax ginseng C.A.Mey.、西洋参Panax quinquefolium L.和三七Panax notoginseng(Burkill)F.H.Chen ex C.Chow&W.G.Huang；西洋参主产于美国威斯康辛州和加拿大安大略省；我国市场上的西洋参主要有两种：一种是进口，一种是引进种植。三七主产于云南、广西。三者都是我国常用的珍贵药材，但其价格差异大；所以,市场上经常出现用其它根类药材，如商陆根、栌兰根等充作人参。伪品不仅不具有药理作用，甚至可能产生毒副作用。

传统的分析鉴别方法，是根据形态和组织结构特征和化学成分鉴别，而这些传统的鉴别方法干扰因素较多，易受环境和植物本身的影响和限制；随着科学的不断前步，应用DNA分子标记技术鉴定中药材及其饮片，取得了快速地发展，在中药材真伪鉴别中发挥了重要的辅助鉴定作用。

RAPD(random amplified polymorphic DNA)标记技术是建立在PCR基础之上，对整个未知基因组序列进行多态性分析，已经广泛应用于品种鉴定、遗传分析等研究，尤其适合于寻找不同样品间的DNA差异。Shaw等首先采用RAPD方法区分人参属3种药材人参、西洋参、三七。RAPD为10碱基的随机序列，通过PCR反应扩增基因组DNA，由于不同基因组DNA序列碱基位点具有明显的差异，在不同区段上与引物发生结合的位点也不相同，因而扩增条带的数量、强弱等特征均不同，产生不连续的DNA产物，获得较多的条带信息，从而使不同的种表现出多态性；RAPD的优点是所需DNA量极少，操作简单，设备要求低，但是由于RAPD引物只有10bp,退火温度较低，重复性相对较差。为了避免这一不足，将其转化为稳定的SCAR(sequence characterized amplified regions)标记。将RAPD转化成SCAR标记技术是1993年Paran和Michelmore提出并应用的，已广泛应用于植物、生物等领域；SCAR标记是在RAPD的基础上，对其特异片段进行回收、克隆和测序，根据测序序列设计特异性引物，并以此引物对基因组DNA进行PCR扩增。具有操作简单、稳定、成本低等优点。张铭采用RAPD技术获得了铁皮石斛基因组DNA的特异性SCAR标记，构建的特异性SCAR标记引物扩增出特异性SCAR片段，可以用于鉴别铁皮石斛。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种人参特异性RAPD标记的DNA片段、鉴别人参的SCAR标记特异性引物对及方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述人参特异性RAPD标记的DNA片段序列如SEQ ID NO.1所示。该DNA片段可用于制备鉴别人参的试剂。

所述鉴别人参的SCAR标记特异性引物对包括引物1和引物2，引物1和引物2是根据权利要求1所述DNA片段设计的引物。优选地，所述引物1的序列为5’-CCCGACTCAAAATCGAAGT-3’(SEQ ID NO.2)，所述引物2的序列为5’-AAGCAAGAAGCAAGGGTAACATA-3’(SEQ ID NO.3)。