[发明专利]一种地沟油的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及地沟油检测，尤其是涉及一种地沟油的检测方法。

背景技术

“地沟油”是指从下水道或者非法途径获取已经油炸或者烹饪过并且废弃的油性残渣，经过过滤、沉淀、加热蒸发分离得到的油。也包括将劣质、过期、腐败了的动物皮、肉、内脏经过简单加工提炼后生成的油脂。广义的地沟油还包括馊水油、万年油等废弃食用油。这些劣质、有毒的地沟油部分流入很多饭店和普通家庭中，给社会和群众健康带来巨大的危害。如果长期食用地沟油，会造成代谢紊乱、消化系统炎症、生殖能力降低、心脑血管慢性疾病等。而且地沟油中的重金属和黄曲霉毒素对细胞和组织具有致畸、致瘤、致癌等风险。为此，国家相关部门出台一些措施(2010年3月18日，国家食品药品监督管理局办公室发布《关于严防“地沟油”流入餐饮服务环节紧急通知》(食药监办食〔2010〕25号)因此，快速鉴别周围的食用油的品质，对打击地沟油的扩散起很大作用。

当前，地沟油与正规的食用油经过一定比例勾兑，如果通过一般的感官判断，很难分辨出地沟油与普通一级油的差别。国内目前具有快速而且快捷地较大批量检测地沟油的方法不多。一般都是应用地沟油的独特物理和化学性质来判别，但是由于地沟油往往经过兑换一定比例的一级食用油，给地沟油的鉴定带来一些困难，影响地沟油成分的准确判定，特别是加入的地沟油比较少时，就比较容易误判。

几种比较常用的检测地沟油的方法如下：

常规理化检测技术。电导率测定法，酸值检测和过氧化值与碘价的测定。电导率测定法被运用的最广泛。地沟油在不断的提炼和处理过程中，掺入了很多金属元素，较合格的食用油的含量高，因此地沟油的电导率高于合格食用油的电导率。彭进等测定潲水油经提取后水相平均电导率达到119us/cm，潲水油与精练菜籽油混合后，潲水油的质量分数与电导率呈线形关系，潲水油与合格食用油电导率测定结果差异有统计学意义。不过地沟油的添加量低于20％时，电导率测定法试验条件操作试验的显著性与重复性就比较差。

色谱检测技术。检测指标为油脂的脂肪酸组成、羰基化合物以及黄曲霉毒素、苯并(a)芘等有毒物质。黄军等对黄曲霉毒素、苯并(a)芘以及总铅总砷分别进行检测，发现即使经过3～4次充分提炼的地沟油，黄曲霉毒素、苯并(a)芘的含量仍然超标10％～20％，与合格油脂的含量差别明显。此外，色谱法可选择检测指标多，可以准确、定量检测痕量物质，效果好，试验成本、对仪器和操作者要求相对较高。

光谱检测技术。紫外可见分光光度法和荧光分析法、拉曼光谱检测技术等。光谱检测技术具有快速、低成本、大量样本检测的优势。但是，光谱技术往往只是关注某个指标，具有局限性。而且对试验仪器条件、数据结果的分析的要求较高。所以，光谱检测技术可以作为一种参考指标，不适合独立应用。

发明内容

本发明的目的是提供快速便捷的一种地沟油的检测方法。

本发明包括以下步骤：

1)对待检测油提取DNA后，以磁珠富集核酸所提取的DNA为模板，利用PCR扩增动物特有基因片段；

2)利用RBC Bioscience HF-16和相应RBC抽取核酸试剂提取全基因组DNA，根据地沟油来源的动物DNA设计特定引物，进行PCR扩增目的条带，然后于2％的琼脂糖凝胶电泳，定性判断是否有地沟油；

3)PCR片段经电泳后的条带定性检测地沟油检测限采用对照品梯度稀释方法来确定。

在步骤1)中，所述动物特有基因片段可采用猪、牛、羊、鸡、鸭的MYOD1的保守区域；在筛选获得动物特有基因片段后，可利用primer 5.0软件，设计特异性引物；所述动物特有基因片段的核苷酸序列为MYOD1；PCR时所用的上游引物为：GTCAACGAGGCCTTCGAGAC(SEQ ID NO:1)，下游引物为：GATGGCGTTGCGCAGGAT(SEQ ID NO:2)。

本发明所述检测地沟油的方法用于定性检测食用油中的地沟油的用途。与当前的检测技术相比，本发明采用RBC Bioscience HF-16经过特异修饰包被的磁珠富集核酸抽取仪结合相应的试剂RBC MagCore试剂盒高效快速的提取核酸模板，并利用特异性引物扩增目的基因。能自动化、较大批量检测、操作简单、用时短等优点。可以快速简单鉴定食用油中是否掺有地沟油。本发明特异性好、方便、快速，结合磁珠分离核酸技术和聚合酶链式反应以达到自动化提取和方便检测的目的。