[发明专利]羊水间充质干细胞的原代分离培养方法有效
| 申请号： | 201510289599.X | 申请日： | 2015-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN104830764B | 公开（公告）日： | 2018-04-13 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;陈海佳;王一飞;卢瑞珊;王小燕;李平;马岩岩 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 羊水 间充质 干细胞 分离 培养 方法 | ||
1.羊水间充质干细胞的原代分离培养方法，其特征在于，包括：
步骤1：明胶铺板后接种羊水组织细胞，培养11h～13h后转移培养液；
步骤2：将所述培养液培养至细胞融合率不低于85％，获得初步纯化的细胞；
步骤3：将所述初步纯化的细胞重悬，培养3h～5h后，更新培养基，继续培养至细胞贴壁，弃除培养液，获得羊水间充质干细胞；
步骤1中所述接种的羊水组织细胞密度为5×105个/mL；步骤1中所述培养的培养基为Lonza完全培养基；步骤1中所述培养的温度为37℃，5％CO2、湿度为95％；
步骤3中所述重悬至细胞密度为1×105个/mL；
步骤3所述重悬采用Lonza完全培养基；步骤3中所述培养的温度为37℃，5％CO2、湿度为95％。
2.根据权利要求1所述的原代分离培养方法，其特征在于，步骤1中所述培养的时间为12h。
3.根据权利要求1所述的原代分离培养方法，其特征在于，步骤2中所述培养的时间为72h。
4.根据权利要求1所述的原代分离培养方法，其特征在于，步骤3所述培养的时间为4h，继续培养的时间为120h。
5.根据权利要求1所述的原代分离培养方法，其特征在于，所述羊水组织细胞的获取方法为：将羊水离心后取沉淀，以PBS缓冲液洗涤，获得羊水组织细胞。
6.根据权利要求1～5任一项所述的原代分离培养方法，其特征在于，所述羊水组织细胞为人羊水组织细胞。
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