[发明专利]一种刺激淋巴细胞活化的纳米基因药物及其制备方法

权利要求书

1.一种融合基因，其特征在于，由融合基因dsNKG2D-IL-21基因的上游引入鼠β-2微球蛋白的信号肽序列，得到的融合基因ATG-sig-dsNKG2D-IL-21，其序列如SEQ ID No:1所示。

2.一种融合基因表达载体pcDNA3.1-sig-dsNKg2D-IL-21，其特征在于，其基因序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一种纳米基因疫苗，其特征在于，由壳聚糖包封pcDNA3.1-sig-dsNKg2D-IL-21融合蛋白表达载体构成。

4.如权利要求3所述纳米基因疫苗，其特征在于，所述壳聚糖为羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖。

5.一种制备权利要求3所述的纳米基因疫苗的方法，其特征在于，步骤如下：

1)pcDNA3.1-sig-dsNKg2D-IL-21融合基因表达载体的构建：以利用PCR分别扩增鼠β2-微球蛋白的信号肽、及鼠NKG2D受体的第一个胞外区的融合片段SEQ ID NO:4，和NKG2D的第2个胞外区SEQ ID NO:5，及IL-21的融合片段SEQ ID NO:6，将这三个片段先后插入pcDNA3.1(-)载体，得到融合蛋白表达载体；

2)纳米基因疫苗的制备：利用大提质粒试剂盒，大量提取无内毒素pcDNA3.1-sig-dsNKg2D-IL-21融合基因表达载体，利用壳聚糖体外溶胀法制备成纳米基因疫苗。

6.如权利要求5所述的纳米基因疫苗的制备方法，其特征在于，壳聚糖：融合蛋白表达载体质量比为1：2～2:1。

7.如权利要求5所述纳米基因疫苗的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖为羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖。

8.如权利要求5所述的纳米基因疫苗的制备方法，其特征在于，使用的大提质粒试剂盒为Qiagen公司大提质粒试剂盒。

9.如权利要求5所述的纳米基因疫苗的制备方法，其特征在于，壳聚糖体外溶胀法制备纳米基因疫苗，包括如下步骤：

1)将融合蛋白表达载体溶液滴加入壳聚糖中，300rpm，室温振荡30分钟，混合均匀；

2)4℃离心机离心20-25分钟，彻底分离游离DNA和纳米基因药物。

10.权利要求3所述的纳米基因疫苗在制备增强免疫或抑制肿瘤的药物中的应用。