[发明专利]检测BRAF基因V600E突变位点的引物、试剂盒及其PCR方法

权利要求书

1.一种检测BRAF基因V600E突变位点的试剂，其特征在于，所述试剂含有引物以及与所述引物配合使用的探针；

所述引物包括：野生型特异性上游引物、突变型特异性上游引物和野生型特异性上游引物与突变型特异性上游引物共用的下游引物；

且所述野生型特异性上游引物序列如SEQ No.17所示，所述突变型特异性上游引物序列如SEQ No.14所示，所述共用的下游引物序列如SEQ No.16所示；

所述探针为Taqman探针，序列如SEQ No.15所示。

2.一种检测BRAF基因V600E突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1所述的试剂。

3.按照权利要求2所述检测BRAF基因V600E突变位点的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR反应管、dNTPs和Taq酶混合液、PCR缓冲液、检测管家基因GAPDH的上游引物、检测管家基因GAPDH的下游引物、检测管家基因GAPDH的探针、阳性质控品和空白对照；

所述检测管家基因GAPDH的上游引物序列如SEQ No.19所示；所述检测管家基因GAPDH的下游引物序列如SEQ No.20所示；所述检测管家基因GAPDH的探针序列如SEQ No.21所示。

4.按照权利要求3所述检测BRAF基因V600E突变位点的试剂盒，其特征在于：所述突变型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针被预先包被于A型PCR反应管内；以及与所述野生型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针被预先包被于T型PCR反应管内。

5.按照权利要求4所述检测BRAF基因V600E突变位点的试剂盒，其特征在于：所述A型PCR反应管内突变型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针浓度分别为50nM-2μm、50nM-2μm、50nM-400nM、1pm-20pm、1pm-20pm、0.05pm-5pm；以及所述T型PCR反应管内野生型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针浓度分别为50nM-2μm、50nM-2μm、 50nM-400nM、1pm-20pm、1pm-20pm、0.05pm-5pm。

6.按照权利要求5所述检测BRAF基因V600E突变位点的试剂盒，其特征在于：所述A型PCR反应管内突变型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针浓度分别为500nM、500nM、100nM、5pm、5pm、2.5pm；以及所述T型PCR反应管内野生型特异性上游引物、所述共用的下游引物、所述探针、所述检测管家基因GAPDH的上游引物、所述检测管家基因GAPDH的下游引物和所述检测管家基因GAPDH的探针浓度分别为500nM、500nM、100nM、5pm、5pm、2.5pm。