[发明专利]鼻咽癌诊治标志物及其应用

说明书

本发明涉及鼻咽癌诊治标志物及其应用，更具体的涉及mir‑326和/或miR‑326在诊治鼻咽癌中的新用途。发明通过高通量测序分析鼻咽癌组织，获得其miRNA表达数据，进而进行生物信息学分析，选取miR‑326进行分子生物学验证，结果显示，miR‑326在鼻咽癌组织中特异性高表达，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及鼻咽癌诊治标志物及其应用，更具体的涉及mir-326和/或miR-326在诊治鼻咽癌中的新用途。

背景技术

miRNA通常由RNA聚合酶II(Pol II)转录生成。Pol II结合在以后形成发夹结构的颈环DNA序列附近。生成的转录本经修饰添加5’帽子结构和3’末端多腺苷酸尾巴结构，并剪切，生成的产物称为初级miRNA(pri-miRNA)，该产物可能长达数千或数百核苷酸，可能包含多个miRNA环结构。

单个pri-miRNA可能含一到六个miRNA前体。这些发夹结构每个由约70nt左右的核苷酸组成。每个发卡结构附以部分序列以利于有效剪切处理。pri-miRNA中的双链发夹RNA结构被叫做DGCR8的核蛋白(DiGeorge Syndrome Critical Region 8)辨认，DGCR8同Drosha酶一起形成微处理(microprocessor)复合体。在该复合体中，DGCR8组织Drosha蛋白的RNase III结构域使其在距离发卡结构约11个核苷酸处切割pri-miRNA，使其释放发卡结构。释放的发卡结构即为前miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在3’存在两个悬空的核苷酸，pre-miRNA 5’为磷酸集团，3’为羟基集团。

在胞浆中，pre-miRNA发夹结构经RNase III Dicer切割处理。这种内源性核糖核酸酶(endoribonuclease)与发夹结构的3’相互作用并在环的3’和5’臂上完成切割，产生长约22nt并不完美匹配的miRNA：miRNA*双链结构。

miRNA与靶mRNA的典型作用方式主要有两种。在大多数情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达。这种方式主要影响蛋白表达水平，并不影响mRNA的稳定性。近来，有研究对翻译抑制理论提出质疑，发现被抑制的靶mRNAs和miRNAs共同聚集于胞浆中被称为P小体(processing bodies，P-bodies)的区域，这个区域还浓缩了许多参与mRNA降解的酶类。P小体可能是作为未翻译mRNA进行暂时的可逆储存的容器，减少一些特定P小体组成蛋白的表达能够缓和miRNA介导的基因表达抑制作用。P小体是胞浆中的一定区域，它包含参与多种转录后过程的蛋白质，例如：mRNA降解(mRNA degradation)、无义介导mRNA衰退(nonsense-mediated mRNAdecay,NMD)，转录抑制及RNA介导的基因沉默(RNA-mediated gene silencing)。

另一种作用方式与siRNA类似，当miRNA与mRNA完全互补配对时，Ago2蛋白通过切割mRNA直接导致其降解，实现基因沉默。以siRNA参与的RNAi为例：siRNA可与RISC结合，作为模板识别mRNA靶子，通过碱基互补配对原则，mRNA与siRNA中的反义链结合，置换出正义链。双链mRNA在Dicer酶、ATP和解旋酶共同作用下产生22nt左右的siRNA，siRNA继续同RISC形成复合体，与siRNA互补的mRNA结合，使mRNA被RNA酶裂解。这个过程也称为转录后基因沉默(PTGS)。