[发明专利]利用微卫星标记Epinmoyn对云纹石斑鱼基因型进行检测的引物和方法

权利要求书

1.一组利用微卫星标记Epinmoyn对云纹石斑鱼基因型进行检测的引物，其特征在于，

其中所述的引物为序列：

正向引物5’ -CCAAGAGCATCATATCGTGC-3’，

反向引物5’-TAGCCGCCACTTACACAGCC-3’，用该引物时的退火温度为53℃，其中所述微卫星标记Epinmoyn的核心序列为：gtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtat atatatatat atatatatat。

2.利用微卫星标记Epinmoyn对云纹石斑鱼基因型进行检测的方法，其特征在于，首先提取云纹石斑鱼血液中的基因组DNA并稀释备用；再利用云纹石斑鱼DNA序列中含有的微卫星核心序列，使用特异性引物对云纹石斑鱼不同个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，从而确定云纹石斑鱼不同个体在Epinmoyn核心序列区的基因型，其中所述的云纹石斑鱼微卫星标记Epinmoyn的特异性引物为：

正向引物5’ -CCAAGAGCATCATATCGTGC-3’，

反向引物5’-TAGCCGCCACTTACACAGCC-3’，用该引物时的退火温度为53℃，所述微卫星标记Epinmoyn的核心序列为：gtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtat atatatatat atatatatat。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，对不同云纹石斑鱼个体的基因组DNA进行的PCR扩增，其加样参数为：每个PCR反应总体积为25μl，包括100ng云纹石斑鱼基因组DNA；10×PCR Buffer，2.5μl；Mg²⁺ 1.5 mmol/L；Taq酶1u；dNTP 0.1mmol/L；特异性引物各10 pmol；最后加ddH₂O至25μl；设置PCR仪的程序参数为：94℃变性2min；94℃ 30sec，53℃ 45 sec，72℃ 40sec，该反应进行35个循环；72℃延伸5 min，4℃保存。

4.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的步骤：将PCR产物在8％的变性聚丙烯酰胺凝胶中以15W恒功率电泳1.5小时进行分离, 以10％的冰醋酸溶液浸泡30min，然后蒸馏水冲洗5min，再以0.1％的硝酸银溶液浸泡30min，用3％的碳酸钠溶液显色 5min，最后用10％的冰醋酸溶液浸泡5min。

5.权利要求2所述的检测方法在云纹石斑鱼群体间遗传多态性图谱构建上的应用。