[发明专利]一种桑黄素D的制备方法

权利要求书

1.一种桑黄素D的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)菌悬液制备

火木层孔菌菌株活化后，置于28℃培养箱中培养，挑选菌落形态较大、生长状态良好的菌株，挑取菌丝置于盛有无菌玻璃珠与生理盐水的锥形瓶中，充分震荡制备菌丝悬液；

2)亚硝酸诱变

取菌丝悬液2mL加入到1mL 0.005mol/L亚硝酸钠溶液和2mL、pH 4.4的醋酸缓冲液混合液中，28℃水浴诱变处理60min后，终止诱变；

3)涂平板培养

取终止液均匀涂布于固体培养基平板上，置于28℃培养箱中暗处培养；

4)挑选菌斑数小于5的再生菌接种至斜面培养基中继续培养，连续挑取优势菌株培养三代至菌体稳定增殖；

5)将诱变后的优势菌株接种至液体发酵培养基中，于28℃，180rpm震荡培养21天，收集发酵液，用三层纱布滤除菌丝体，发酵液过大孔树脂柱，经水洗、95％乙醇洗脱并收集醇提部分，旋蒸、干燥。

2.根据权利要求1所述的一种桑黄素D的制备方法，其特征在于：所述的终止诱变的具体过程为：取诱变液0.5mL加入到1mL、pH 8.6的磷酸氢二钠溶液中，使混合液的pH呈中性，终止诱变。

3.根据权利要求1所述的一种桑黄素D的制备方法，其特征在于：所述的液体发酵培养基为：葡萄糖20g/L、蛋白胨+酵母粉7g/L、磷酸氢二钾1g/L、无水硫酸镁0.5g/L，pH自然。

4.根据权利要求1所述的一种桑黄素D的制备方法，其特征在于：所述的固体培养基为：液体发酵培养基添加2％琼脂。

5.根据权利要求1所述的一种桑黄素D的制备方法，其特征在于：所述的火木层孔菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。