[发明专利]用于西瓜花药愈伤组织诱导的培养基及利用该培养基诱导西瓜花药愈伤组织的方法

说明书

技术领域

本发明涉及西瓜花药愈伤组织诱导方法和用于诱导的培养基，具体涉及用于西瓜花药愈伤组织诱导的培养基及利用该培养基诱导西瓜花药愈伤组织的方法。

背景技术

花药培养是获得单倍体的有效途径。目前，通过花药培养获得高配子胚胎发生的作物，主要在谷物、十字花科和一些茄科类作物上。花药培养诱导单倍体受很多因素的影响，如：诱导培养基，小孢子发育时期，前期处理，培养条件，供体植株生长状态，基因型等。早在1981年，薛光荣等在西瓜品种“琼酥”上，成功诱导出花粉植株，随后又在“周至红”西瓜品种上，获得了花粉植株，但其愈伤组织诱导率及分化频率均较低，在育种上难以利用，没有得到推广；袁万良“YUANWanliang,FURuiming,LEIBaolin.Thepreliminaryreportofwatermelonantherculture[J].ShanxiAgriculturalSciences,1995,(1):29-30.袁万良，付润民，雷保林等.西瓜花培试验初报[J].陕西农业科学，1995，(l)：29-30.”、魏瑛“WEIYing.Theeffectsoflow-temperaturepretreatmentonanthercallusinduction[J].AgriculturalScienceandTechnology,1999,(9):34-36.魏瑛.低温预处理对西瓜花药诱导愈伤组织的影响[J].甘肃农业科技,1999,(9):34-36.”等研究，使西瓜花药培养的愈伤组织诱导率有所提高，但没有后续报道，对愈伤组织的质量也无明确说明；缑艳霞“[GOUYanxia.Thetechnologyresearchofwatermelonantherculture[D].Hangzhou,ZhejiangUniversity,2006.缑艳霞.西瓜花药离体培养技术研究[D].杭州：浙江大学，2006.”李娟“[13]LIJuan.Thestudyofwatermelonantherandmicrosporeculture[D].Yaan,SichuanAgriculturalUniversity,2006.李娟.西瓜花药和小孢子培养研究[D].雅安:四川农业大学,2008.”等对西瓜花药和小孢子培养进行了研究，但未取得显著成效。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了用于西瓜花药愈伤组织诱导的培养基及利用该培养基诱导西瓜花药愈伤组织的方法，提出了适宜的西瓜花药有效愈伤组织诱导方法，为西瓜花药培养再生技术体系的建立奠定基础。

本发明的技术方案是：用于西瓜花药愈伤组织诱导的培养基，所述培养基是在MS培养基的基础上添加NAA、6-BA、KT和CH，所述NAA、6-BA、KT和CH的浓度分别为0.2-1.0mg·L^-1、2.0mg·L^-1、1.0mg·L^-1和300-500mg·L^-1。

本发明的进一步改进包括：

培养基是在MS培养基的基础上添加NAA、6-BA、KT和CH，所述NAA、6-BA、KT和CH的浓度分别为1.0mg·L^-1、2.0mg·L^-1、1.0mg·L^-1和500mg·L^-1。

本发明的另一目的在于提供利用所述的培养基诱导西瓜花药愈伤组织的方法，包括以下步骤：取单核靠边期花蕾，低温处理2d-3d，接种于所述培养基上，高温预培养2-3d。

所述的单核靠边期花蕾选取时间为晴天早上6：00-8:00。

所述的单核靠边期花蕾选自5-6月份花蕾纵径2-4mm，横径3-4mm，萼片紧贴花瓣，花瓣闭合，呈深绿色，花药颜色呈淡黄色至黄绿色。

所述的低温处理包括：取花蕾，用自来水冲洗3次，再用湿纱布包裹好，置于4℃下处理，然后，在无菌操作台上，将预处理后的花蕾投到75％的酒精中消毒30s，再用0.1％的HgCl₂消毒8分钟，最后用无菌水冲洗3-5次；消毒完成后，把无菌的花蕾用无菌的刀子镊子剥开，取出花药，接种在诱导培养基上培养。

所述的高温预培养包括：把接种后的花药分别放入35℃恒温培养箱内培养2d。

本发明还提供了上述的培养基在西瓜花药愈伤组织诱导中的应用。

所述的应用中的西瓜是HJ001、西农8号和大果黑美人。