[发明专利]一种离子交换和反相层析结合分离纯化眼镜蛇毒神经毒素的方法在审
| 申请号： | 201510292781.0 | 申请日： | 2015-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN104974239A | 公开（公告）日： | 2015-10-14 |
| 发明（设计）人： | 秦正红;李国庆 | 申请（专利权）人： | 苏州人本药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 张建纲 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏州大学*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 离子交换 层析 结合 分离 纯化 眼镜 蛇毒 神经 毒素 方法 | ||
1.一种眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将0.05-0.15g/mL的眼镜蛇毒粗品溶液进行离心，过滤，得供试品溶液A，备用；
(2)将所述供试品溶液A通过离子交换层析纯化，梯度洗脱，HPLC检测，收集，得供试品溶液B，备用；
(3)将所述供试品溶液B通过反相柱层析纯化，梯度洗脱，HPLC检测，收集，浓缩，干燥，即得眼镜蛇毒神经毒素的纯品。
2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，所述离子交换层析的介质为CM Sepharose Fast Flow。
3.根据权利要求1或2所述的分离纯化方法，其特征在于，所述反相柱层析的介质为C18，粒径为5-50μm。
4.根据权利要求1-3任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)的流动相为pH 6.8-7.0的磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求4所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以8-12mM NaH2PO3缓冲液为流动相A，以包括1M NaCl的8-12mM NaH2PO3缓冲液为流动相B。
6.根据权利要求1-5任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中，以乙腈为流动相A，以水为流动相B。
7.根据权利要求1-6任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)中梯度洗脱的步骤为：A：B体积比为100％：0％，A：B体积比为90％：10％，A：B体积比为85％：15％，A：B体积比为40％：60％。
8.根据权利要求1-7任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(3)中梯度洗脱的步骤为：A：B体积比为5％：95％，A：B体积比为10％：90％，A：B体积比为60％：40％。
9.根据权利要求5-8任一项所述的分离纯化方法，其特征在于，
所述步骤(2)中，所述梯度洗脱前还包括以下步骤：先用1-3个柱床体积的流动相B进行活化洗脱，再用2-4个柱床体积的流动相A进行平衡洗脱；
所述步骤(3)中，所述梯度洗脱前还包括以下步骤：先用1-4个柱床体积的100％甲醇进行活化洗脱，再用2-5个柱床体积的A：B体积比为5％：95％的流动相进行平衡洗脱；
所述步骤(1)中，所述过滤为采用0.45μm微孔滤膜进行过滤。
10.一种权利要求1-9任一项所述的分离纯化方法得到的眼镜蛇毒神经毒素。
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