[发明专利]一种体外胶质疤痕形成模型及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，所述的构建方法包括以下步骤：

A.将纯化后的脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞以数量比为3:4的比例分别种植于腔室载玻片上相邻的小室内，小室底部的载玻片已预先用50-75μg/ml的L-多聚赖氨酸包被，每个小室内为100μl～300μl的细胞悬液，脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞细胞密度为1×10⁴/ml～8×10⁵/ml；

B.0.5小时后将小室之间的隔板移除，总量添加5ml含10％FBS的DMEM/F12培养基，于37℃，5％CO₂培养箱培养2天以上；

C.当观察到脑脊膜纤维细胞和星形胶质细胞这两种细胞相互靠拢时，显微镜下用锐器在两种细胞交界处作机械划痕，所述的机械划痕类似“丰”字，换含10％FBS的DMEM/F12培养液后继续培养，培养6天以上形成类胶质疤痕的结构。

2.根据权利要求1所述的一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，其特征在于，步骤A所述的细胞悬液，是用含10％FBS的DMEM/F12培养液来稀释细胞的。

3.根据权利要求1或2所述的一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，其特征在于，步骤B中，5％CO₂培养箱培养3～5天。

4.根据权利要求1或2所述的一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，其特征在于，步骤C所述的锐器为一次性1ml注射器针尖。

5.根据权利要求1或2所述的一种体外胶质疤痕形成模型的构建方法，其特征在于，步骤C所述的机械划痕类似“丰”字，为横向划痕16道，每道用锐器划1次；和纵向划痕1道，纵向划痕一道用锐器划16次，且每次都贯通横向划痕十六道。

6.一种根据权利要求1至5任一所述的体外胶质疤痕形成模型的构建方法获得的体外胶质疤痕形成模型。

7.根据权利要求6所述的体外胶质疤痕形成模型，其特征在于，模型中的类胶质瘢痕具有以下特性：脑脊膜纤维细胞包裹在细胞团的外侧，星形胶质细胞被包裹在细胞团的中心部位，细胞外基质也主要位于细胞团的外侧及脑脊膜纤维细胞与星形胶质细胞的交界处。

8.根据权利要求6或7所述的体外胶质疤痕形成模型，其特征在于，模型中的类胶质瘢痕具有以下特性：

免疫荧光细胞化学技术检测胶质疤痕细胞外基质中FN、GFAP、ephrinB2、EphB2、NG2、Phosphocan、Neurocan呈阳性。

9.一种如权利要求6所述的体外胶质疤痕形成模型在胶质疤痕形成的机制研究中的应用。

10.一种如权利要求6所述的体外胶质疤痕形成模型在筛选治疗胶质疤痕药物中的应用。