[发明专利]牛支原体肺炎组织灭活疫苗的制备方法、配方及使用方法

权利要求书

1.牛支原体肺炎组织灭活疫苗的制备方法，其特征在于，按以下方法制得：

1.1抗原液的制备

1.1.1选取自然感染支原体肺炎且濒死的患牛，无菌条件下取出病变肺脏、淋巴结和脾脏，现用或-20℃保存备用；

1.1.2将上述新鲜的病变组织或冻存的病变组织解冻，去除结缔组织，剪小后加入4℃预冷的灭菌生理盐水，经研磨后制得组织匀浆液；

1.1.3将1.1.2的组织匀浆液连续冻融3次；

1.1.4将经1.1.3处理的组织匀浆液用150目滤网真空抽滤，所得滤液于4℃静置过夜后，再经4℃离心处理，去除油脂和沉淀，得到抗原液；

1.2灭活抗原液的制备

向1.1.4所得的抗原液加入37％的甲醛，使抗原液中甲醛的终浓度为0.3％，4℃放置72h灭活。按每毫升抗原液加入1000单位青霉素和1000单位链霉素，混匀后得到灭活抗原液；

1.3组织灭活疫苗的制备

1.3.1将8％AlCl3和4％NaOH溶液按1:0.955的体积比混合，得到氢氧化铝胶体，115℃高压灭菌15min，备用；

1.3.2将灭活抗原液和氢氧化铝胶体按4:1的体积比例混合，获得牛支原体肺炎组织灭活疫苗。

2.如权利要求1所述的牛支原体肺炎组织灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述1.1.2中的组织匀浆液，是将去除结缔组织后的病变肺脏、淋巴结和脾脏剪成10mm的小块，按1:5(m/v)加入4℃预冷的生理盐水，在组织匀浆机中匀浆所得。

3.如权利要求1所述的牛支原体肺炎组织灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述1.1.4中的抗原液，是将滤液于4℃静置过夜后，去除上部的油脂，再经4℃温度离心机以4000rpm离心1h，去除沉淀所得。

4.如权利要求1所述的牛支原体肺炎组织灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述疫苗4℃保存，6个月有效。

5.牛支原体肺炎组织灭活疫苗的配方，其特征在于，包含灭活抗原液和氢氧化铝佐剂，两者的比例为每毫升灭活抗原液含0.25毫升氢氧化铝佐剂。

6.牛支原体肺炎组织灭活疫苗的使用方法，其特征在于，30日龄犊牛颈部三角区肌肉注射2mL牛支原体肺炎组织灭活疫苗，60日龄以2mL剂量加强免疫一次。