[发明专利]一种采用全细胞转化高效生产α‑苯丙酮酸的方法有效
| 申请号： | 201510295252.6 | 申请日： | 2015-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN104830815B | 公开（公告）日： | 2018-02-23 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;刘龙;李江华;堵国成;侯颖;顾汉章;徐堃 | 申请（专利权）人： | 江南大学;江苏汉光生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12N15/53;C12N1/21;C12P7/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 采用 细胞 转化 高效 生产 丙酮酸 方法 | ||
1.一种L-氨基酸脱氨酶突变体，其特征在于，是以核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因编码的酶作为亲本改造得到，所述L-氨基酸脱氨酶突变体是D165K/F263M/L336M或D165K或F263M或L336M。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.权利要求1所述L-氨基酸脱氨酶突变体在生产α-苯丙酮酸中的应用。
4.含有权利要求1所述L-氨基酸脱氨酶突变体的全细胞催化剂，其特征在于，是将编码所述L-氨基酸脱氨酶突变体的基因转化大肠杆菌得到重组菌，将重组菌作为全细胞催化剂。
5.根据权利要求4所述的全细胞催化剂，其特征在于，所述大肠杆菌是E.coli BL21(DE3)。
6.应用权利要求4或5所述全细胞催化剂转化L-苯丙氨酸生产α-苯丙酮酸的方法，其特征在于，将L-苯丙氨酸10-12g/L、全细胞催化剂1.2-1.5g/L，在pH8.0的20mM Tris-HCl中，于36-37℃、200-220rpm转化6h。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述全细胞催化剂是湿菌体。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述全细胞催化剂的获得，是将含有L-氨基酸脱氨酶突变体的重组大肠杆菌按1-2％接种量接到1.8L发酵培养基中，搅拌转速、通气量和温度分别为400rpm、1.0vvm和28℃，当OD600达到0.6-0.8，加入0.4mM IPTG诱导L-氨基酸脱氨酶表达；诱导5-7h后，8,000rpm低温离心10-15min，收集菌体，用20mM pH8.0的Tris-HCl缓冲液洗两遍菌体即得。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，发酵培养基：蛋白胨12g，酵母提取物24g，甘油4mL，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100mL灭菌的17mmol/L KH2PO4和72mmol/L K2HPO4的溶液。
10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，全细胞转化体系为：L-苯丙氨酸10g/L，全细胞催化剂1.2g/L，反应在pH 8.0的20mM Tris-HCl中进行，37℃，200rpm转化6h。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学;江苏汉光生物工程有限公司，未经江南大学;江苏汉光生物工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510295252.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种自动绕线机构
- 下一篇：一种基于用户行为分析的查询性能优化方法
